细梗香草皂苷活性炭脱色工艺单因素试验

准确移取稀释 20 倍后的细梗香草皂苷提取 液 10mL 于具塞试管中，加入 3% 活性炭，摇匀 后放入 60℃水浴锅中脱色 60min，固定其他条 件，分别对活性炭添加量、脱色时间、稀释梯度 及脱色温度 4 个因素进行单因素脱色试验，考察 各因素对细梗香草皂苷的保留率和脱色率的影 响。单因素设计水平见表 1。

正交试验优化脱色条件

为考察各因素的交互影响，根据单因素试验 结果，采用正交试验设计，以活性炭添加量、脱 色时间、稀释梯度及脱色温度为 4 个因素，细梗 香草皂苷提取液的保留率和脱色率为考察指标， 按照表 2 设计 L（9 34 ）正交试验，从而优化脱色 工艺条件。

细梗香草皂苷抑菌活性试验

将活化后培养至对数期的大肠杆菌、金黄色 葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和白色念球菌的菌悬液 浓度调至 106 CFU/mL，取 100µL 菌液于 LB 培养 基平板上均匀涂布，打孔器分别打孔，孔中加入 不同浓度梯度的细梗香草皂苷提取液 100µL，平 板置于 4℃条件下预扩散 2h 后，白色念球菌于 30℃恒温培养，其余放入 37℃恒温培养 24h 后， 游标卡尺测定抑菌圈的直径。同时以甲醇溶液作 为空白对照。

活性炭添加量对脱色效果的影响

如图 1 所示，总体上随着活性炭添加量的增加，皂苷脱色率逐渐升高，保留率渐渐减小。当 添加量达 3% 后，皂苷脱色率的增幅趋势变小； 保留率随活性炭用量增加而逐渐减小。根据试验 结果，为保证皂苷脱色率和保留率达一定水平， 选取活性炭用量 2% 为最佳添加量。

脱色时间对皂苷脱色效果的影响 由图 2 可以看出，伴随着脱色时间的延长， 皂苷的脱色率有所上升，在 60min 之后趋于平 稳，而保留率相对处于比较平稳的水平。这说 明，当试验进行到一定程度后，脱色时间对脱色 效果的影响较不明显，这可能由于活性炭对色素 的吸附作用在一定时间内达到了平衡。所以考虑 选择 60min 为脱色时间最优条件。