混合器的酒糟微生物多样性分析

1 材料

MastercyclerPCＲ 仪 ( 德 国 Eppendorf 公司) ; PowerPac3000 电 泳 仪 ( 美 国 Bio-Ｒad 公 司) ; Iontorrent 高通量测序平台、Pico-21 台式离心 机 ( 美国 Thermo Fisher 公司) ; GL-88B 漩涡混合 器 ( 海门其林贝尔仪器制造有限公司) 。采用 CTAB 法分别 提取酒曲与酒糟中微生物基因组 DNA。具体步骤 为样品预处理，CTAB 法 提 取 缓 冲 液，采 用 Tris 酚、氯仿、异戊醇抽提，异丙醇沉淀，70%乙醇洗 涤，DNA 溶解及 ＲNA 酶酶解等。再用 1%琼脂糖 凝胶电泳检测 DNA 纯度和浓度，－20 ℃保存备用。利 用 引 物 ( 341F、806Ｒ) 和 引 物 ( ITS1F、ITS2Ｒ) 分 别 对 细菌 16S rDNA 的 V3-V4 区和真菌内源转录间隔 ITS1 区进行 PCＲ 扩增，产物使用 2%琼脂糖凝胶进 行电泳检测回收，并用 GeneJET 胶回收试剂盒纯 化，利用单端测序的方法，构建小片段文库，构建 好的文库经过 Qubit 定量和文库检测合格后，再采 用 IonS5TM XL 测序平台进行上机测序 ( 北京诺禾致源科技股份有限公司) 。

2 方法与结果

另有未 得 到 分 类 学 注 释 的 菌 群 丰 度 值 为 8%，其他真菌菌门丰度值小于 1%。 相对于酒曲，酒糟中细菌在门分类水平上还包括相 对丰度值较大的放线菌门和蓝细菌门，并有未得到 分类学注释的菌群; 而真菌群中两者在门分类水平 上种 类 差 异 较 小，但各菌门的相对丰度值差异 较大。由于高通 量测序技术分析酒曲与酒糟检测出大量微生物，多 数菌群相对丰度值较低，为方便直观查看，拟选择 在属水平上的优势菌属 ( 丰度≥1. 0%) 进行统 计，其他 菌 门 ( 丰 度 ＜ 1. 0%) 同 样 归 纳 为 其 他 ( Others)。也可能是宜宾地区酒曲特有的微生 物体系，这与当地的制曲独具地域性特色密切相 关。而对于酒曲和酒糟间存在微生物体系的较大差 异性，则可能与厂家发酵生产白酒的环境 ( 原料、 用水、空气、窖池等) 及样品的加工与储存环境 相关。

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