旋转摇床对癌细胞凋亡作用的研究！！！

     乳 腺癌细胞凋亡水平上升时，包括 miR⁃145⁃5p 在内 的多种 miRNA 水平上升 。miR⁃145⁃5p 与 ATF1 和乳腺癌细胞凋亡之间的 联系，本研究旨在探讨 miR⁃145⁃5p 靶向调控 ATF1 对乳腺癌细胞 MCF7 凋亡的影响。胎 牛 血 清（Thermo 公 司）、1640 培养基（GE 公司）、pmiR⁃RB⁃Report 质粒 （上海钦诚）、HiPerFect Transfection Reagent（德国 凯杰），P21、BAX、ATF1、BCL⁃2、Caspase9、Tubulin 抗体（英国 ABCAM），蛋白裂解液（碧云天）、山羊 抗大鼠 IgG 和山羊抗兔 IgG（H+L）（艾美捷）、PBS （上海生工）、蛋白酶抑制剂（上海睿铂赛）、青链霉 素 混 合 液（上 海 索 宝）、ClonExpress II One Step Cloning 试剂盒（南京诺唯赞），Luciferase 荧光素酶 报告检测试剂盒（武汉艾美捷），U6 和 miR⁃145⁃5p 荧光定量 PCR 引物、qPCR 和 miRNA 反转录试剂 盒（广 州 复 能 基 因），miRNA 快 速 提 取 试 剂 盒 （HaiGene）、Western blot 装置（美国伯乐公司），细 胞培养箱、生物安全柜购和酶标仪（美国 Thermo）、 微量加样器（法国 Gilson）、冷冻离心机（德国 Ep⁃ pendorf）、旋转摇床（江苏海门市其林贝尔）、脱色 摇床（大龙兴创）、荧光定量 PCR 仪（美国 ABI）； miR⁃145⁃5p 序列来自 miRBase，miR⁃145⁃5p 模似物 和 miR⁃145⁃5p 抑制物由上海生工生物工程股份有 限公司合成。

    miRNA 是 内 源 性 22nt 非 编 码 RNA，其 靶 向 mRNA 用于切割或翻译抑制。许多 miRNA 调节程 序性细胞死亡，包括细胞凋亡、自噬和坏死性凋 亡。一系列研究表明，miR⁃145⁃5p 是几种肿瘤 的肿瘤抑制因子，如结肠癌 、乳腺癌、和前 列腺癌 ，而 miR⁃145⁃5p 抑制乳腺癌的机制尚未 报道。ATF1 是构成基本亮氨酸拉链转录因子的 亚家族的一员，介导各种细胞外信号的转录反应， 它参与细胞活力和细胞转化 。