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流感病毒监控分析(贝尔涡旋仪使用)

返回列表 来源:未知 发布日期:2020-06-22 09:07【

1 材料


QIAGEN OneStep RT-PCR Kit、QIAamp® Viral RNA mini Kit(52904)、RNeasy® Mini Kit (74104),均购自 QIAGEN 公司;2×SmartHyb 杂交液,购自北京美莱博医学科技有限公司;杂交 围栏,购自博奥(北京)生物技术有限公司。通用 引物 Uf:TCACTTGCTTCCGTTGAGG;通用引物 Ur:TAMRA-GGTTTCGGATGTTACAGCGT。 引 物均由上海生工生物公司合成。  高速微量离心机(Sigma,USA);水浴锅 (PolyScience,美国);涡旋仪(江苏海门市其林贝尔公司);生物安全柜(NU,美国);恒温 鼓风干燥箱(中国智成);Eppendorf Mastercycler PCR 仪(Eppendorf AG,德国);PerkinElmer ScanArray Gx plus(PE,美国)。



2 方法


取扩增产物 5.2 μL、杂交质控探针 0.8 μL 和 2×SmartHyb 杂交液 6 μL 于 0.2 mL PCR 管中,混 匀;95 ℃变性 5 min,立即冰浴 3 min,4 000 r/min 离心 5~10 s,然后将离心管放回冰浴;在杂交盒的 沟槽中加入 200 μL 蒸馏水,以防止杂交体系蒸发, 然后将芯片正面向上放入盒中;将已变性的杂交样 品从冰盒中取出,用枪头轻轻吹吸 3~5 次后,取 7 μL 杂交混合液加到探针点阵区,迅速盖上盖片 和杂交盒并密封;将杂交盒水平放入 52 ℃的水浴 锅中,杂交 2.5 h。






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