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信号通路的要素探讨

返回列表 来源:未知 发布日期:2020-07-29 08:52【

1 材料仪器


高速台式冷冻离心机(JW-3021HR): 安徽嘉文;水 平 摇 床(TS-1000):海 门 市 其 林 贝 尔; 自动曝光 仪(JS-1070P):上 海 培 清;荧 光 定 量 PCR 仪(PIKOREAL96):ThermoScientific。抵当陷胸汤:全瓜蒌30g,桃仁15g,水 蛭、虻虫、制大黄、清半夏各10g,黄连5g;由安徽中 医药大学国医堂门诊部提供,煎煮浓缩制备成冻干 粉。


2 结果


每组取肝脏组织100mg, 加入细胞裂解液1mL,离心后取上清液测总蛋白浓 度;经10% SDS-PAGE电泳进行分离,将分离蛋白转 移到PVDF膜上,转膜结束后用5%脱脂奶粉室温封 闭2h;根据一抗的说 明 书,TGF-β1、Smad3 和 p- Smad3抗体属性为兔抗1∶1000稀释,4 ℃过夜,取出 PVDF膜,加 PBST 洗 涤 液 洗3次;根 据 二 抗 的 说 明 书,按照1∶10000用二抗稀释液稀释,室温孵育2h;使 用ECL发光试剂盒检测 TGF-β1、Smad3和 p-Smad3 的蛋白表达水平。






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