涡旋混合器在中药口服液体制剂抑菌效力测定的

中药口服液体制剂( 如合剂、糖浆剂、酒剂等) 多含 动植物成分，蛋白质和糖分含量高，且原材料中携带大 量微生物，产品在生产、贮藏和使用过程中易受微生物 污染，甚至发生霉变，故应确认药物的抗菌活性。如药品 本身抑菌效力不足，应根据制剂特性添加适宜的抑菌 剂，以防止潜在的微生物污染。抑菌剂( 也称防腐 剂) 是一类防止或限制微生物生长与繁殖的化学药品， 其主要作用是保证药剂质量，防止药剂尤其是多剂量包 装制剂的微生物污染 。

仪器: LDZX － 80KCS 型压力蒸汽灭菌器( 上海申安 医疗器 械 厂) ; HFsafe － 1800TE Ⅱ，B2 型 生 物 安 全 柜 ( 上海力申科学仪器有限公司) ; LＲH － 250F 型生化培 养箱; MJ 250FI 型霉菌培养箱( 上海一恒科学仪器有限 公司) ; VOＲTEX － 5 型涡旋混合器( 海门市其林贝尔仪器制造有限公司) ; Densi CHEK Plus 比浊仪( 美国生物 梅里埃公司) 。 培养基及稀释液: 胰酪大豆胨琼脂培养基( TSA) ， 沙式葡萄糖琼脂培养基( SDA) ，胰酪大豆胨液体培养基 ( TSB) ，沙氏葡萄糖液体培养基( SDB) ，pH 7． 0 无菌氯 化钠 － 蛋白胨缓冲液，均由北京三药科技开发公司提 供，培养基适用性检查符合 2015 年版《中国药典》要求。

菌 种 : 细 菌 ，包 括 金 黄 色 葡 萄 球 菌〔CMCC( B) 26003〕、铜绿假单胞菌〔CMCC( B) 10104〕和大肠埃希菌 〔CMCC( B) 44102〕; 真 菌 ，包 括 白 色 念 珠 菌〔CMCC( F) 98001〕和黑曲霉〔CMCC( F) 98003〕。上述 5 种标准菌株均 购自中国食品药品检定研究院，工作用菌株为第 2 代。 试药: 银翘解毒合剂( 样品 A 为每瓶 100 mL，抑菌 剂为山梨酸，含量为 0． 1% ) ; 止咳枇杷合剂( 样品 B 为 每瓶 120 mL，抑菌剂为苯甲酸钠，含量为 0． 26% ) ; 参术 止带糖浆( 样品 C 为每瓶 210 mL，抑菌剂为苯甲酸钠， 含量为 0． 30% ) 。

接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌及铜绿假单胞菌 的新鲜培养物至 TSB 液体培养基中，35 ℃ 培养 18 h; 接 种白色念珠菌于 SDB 液体培养基，25 ℃ 培养 24 h; 用 0． 9% 无菌氯化钠溶液稀释并制成试验所需浓度的菌悬 液。接种黑曲霉的新鲜培养物至 SDA 琼脂培养基中，25 ℃培 养 7 d 或 直 至 获 得 丰 富 的 孢 子 ，加 入 3 ～ 5 mL 含 0． 05% 聚山梨酯 80 的 0． 9% 无菌氯化钠溶液，将孢子 洗脱，然后吸出孢子悬液置无菌试管内; 用含 0． 05% 聚 山梨酯 80 的 0． 9% 无菌氯化钠溶液稀释，并制成试验 所需浓度的菌悬液。

供 试 液 制 备 : 取 各 样 品 10 mL，分 别 加 入 90 mL pH 7． 0 无菌氯化钠 － 蛋白胨缓冲液，45 ℃ 恒温振荡 15 min，制成 1 ∶ 10( V ∶ V) 的供试液。 计数方法适用性试验: 取 5 种供试液，分装于 5 个 无菌试管中，每管装量 9． 9 mL，再分别加入含菌量不大于 104 cfu / mL 的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃 希菌、白色念珠菌、黑曲霉试验菌液 0． 1 mL。用 0． 1 mL pH 7． 0 无菌氯化钠 － 蛋白胨缓冲液代替菌液同法制备 供 试 品 对 照 组 ，以 及 不 加 样 品 的 菌 液 对 照 组。分 别 吸 取试验组、供试品对照组、菌液对照组液体各 1 mL， 置直径90 mm 的无菌平皿中，平行 2 份，细菌注入约 20 mL 温度不超过 45 ℃融化的 TSA 培养基，摇匀，凝固 后置 35 ℃ 倒置培养 2 ～ 3 d; 真菌注入约 20 mL 不超过 45 ℃ 融化的 SDA 培养基，摇匀，凝固后置 25 ℃ 倒置 培养 3 ～ 5 d。 计数方法适用性试验回收率: 试验组菌落数减去供 试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值计算 回收率，结果见表 1。各试验菌的回收率均在 0． 8 ～ 1． 0 范围内，符合要求，说明抑菌效力试验中的微生物存活 菌落数的测试可采用平皿法( 1 ∶ 10，1 mL) 进行。

3 讨论

药品在使用和保存过程中有可能被空气中的微生 物污染，进而产生安全隐患。抑菌剂是药物制剂中常 见的一种附加剂，企业在开发阶段都必须确认药品中 抑菌剂的抑菌效力。近年来，国产制剂抑菌剂滥用问 题越来越受关注。2010 年版《中国药典》首次收载了抑 菌效力检查法，制定了控制标准和检测方法，2015 年 版《中国药典》对抑菌效力检查法做了很大调整。现有 文献主要着眼于眼用制剂抑菌剂抑菌效力的检查 ， 其他剂型抑菌效力检测方法的探讨目前较少。本研 究中依据药典方法对 3 种中药口服液体制剂进行了 加菌试验，比较试验菌在样品中的存活率，以探讨样品的 抑菌效力，对生产企业研发阶段抑菌浓度的确定有一定参考价值。



 

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