其林贝尔脱色摇床在对卵巢储备功能的使用

卵巢储备功能下降是指卵巢内所剩卵母细胞的数量、 质量、潜能下降，导致女性生育力下降，性激素缺乏，常 指双侧卵巢窦卵泡数＜6 个，抗苗勒管激素 ( AMH) 值低 于 0. 5～ 1. 1 ng /mL。治疗方法以激素补充治疗 ( HＲT) 为主，但长时间应用后会增加卵巢癌、乳腺癌、子宫内膜 癌的发生风险，患者依从性差; 对有生育要求而采用体 外受精-胚胎移植 ( IVF-ET) 的患者，也存在着周期取消率 高、获卵率及优胚率低等问题，从而导致不良结局。

1 材料

1. 1 动 物

8 周 龄 SPF 级 雌 性 SD 大 鼠 65 只，体 质 量 ( 210±10) g，购自浙江省实验动物中心，动物合格证号 SCXK ( 浙) 2014-0001，自 由 饮 水 和 摄 食，室 温 ( 22 ± 2) ℃，相对湿度 50% ～ 70%，昼夜各 12 h。

1. 2 试剂

雷公藤多苷片 ( 浙江得恩德制药有限公司， 50 mg /片，批号 Z33020422) 。坤泰胶囊 ( 贵阳新天药业股 份有限 公 司，0. 5 g /粒，批 号 Z20000083) ; 戊 酸 雌 二 醇 ( 补佳乐) ( 拜耳医药保健有限公司广州分公司，1 mg /片，批号 J20130009) ; 黄体酮胶囊 ( 安琪坦) ( 浙江仙琚制药 股份有限公司，0. 1 g /片，批号 H20041902) 。

1. 3 仪器

CX21 型高分辨显微镜 ( 日本 Olympus 公司) ; ABI7500 型 Ｒeal-time PCＲ 仪 ( 美 国 Applied Biosystems 公 司) ; Mastercycler nexus PCＲ 仪、台式高速冷冻离心机 ( 德 国 Eppendorf 公司) ; 垂直电泳槽、电泳仪 ( 美国 Bio-Ｒad 公司) ; TS-1000 型脱色摇床 ( 海门市其林贝尔仪器制造公 司) ; TS-12F 型生物组织自动脱水机 ( 孝感市宏业医用仪 器有限公司) ; BMJ-M 型病理组织包埋机和包埋冷冻台 ( 天津天利航空机电有限公司) ; EnSpire 2300 型 酶 标 仪 ( 上海巴玖实业有限公司) 。

2 方法

65 只大鼠适应性喂养 6 d，期间进行阴 道脱落细胞涂片观察，确认所有大鼠动情周期变化规律， 随机分为正常组 10 只、模型组 55 只。参照高慧等方法，将雷公藤多苷片以生理盐水配成 50 mg /kg 剂量，每日 上午 9 点开始连续灌胃 14 d，正常组大鼠同时予等体积生 理盐水。造模第 8 天起，进行阴道脱落细胞学涂片，观察 大鼠动情周期变化，剔除造模失败者后随机分为模型组、 西药组各 11 只，以及坤泰胶囊组、中西药组各 12 只。西 药组 对 处 于 动 情 前 期 的 大 鼠 先 给 予 戊 酸 雌二醇片 ( 0. 12 mg /kg) 2 d，再给予黄体酮胶囊 ( 18 mg /kg) 2 d， 对处于动情后期的大鼠给药顺序恰好相反; 坤泰胶囊组灌 胃给药剂量 0. 5 g /kg; 中西药组在坤泰胶囊基础上加用上述 2 种西药; 正常组、模型组大鼠灌胃给予等体积生理盐 水。给药期间，各组大鼠按体质量调整给药剂量，连续给 药 3 个动情周期。药物干预结束后 15 d ( 保证所有大鼠处于动情 前期) 大鼠禁食不禁水，第 2 天水合氯醛麻醉，腹主动脉 取血，无菌下迅速取出卵巢组织，称定质量，一半置于 －80 ℃冰箱中待测，另一半置于 4%多聚甲醛中待测。 将置于 4%多聚甲醛中的大鼠卵巢组织用 梯度乙醇脱水，石蜡包埋，切片，脱蜡，常规 HE 染色， 光学显微镜下观察卵巢变化。

3 结果

给予雷公藤多苷片的 55 只大鼠呈现不同 程度的动情周期紊乱，表现为延长与停滞。连续灌胃 2 周 后，46 只大鼠出现连续动情周期紊乱，造 模 成 功 率 为 83. 6%; 2 周治疗结束后，阴道脱落细胞涂片显示 28 只大 鼠动情周期恢复 ( 28 /46，60. 9%) ，其中模型组 3 只 ( 3 / 11，27. 3%) ，西药组 8 只 ( 8 /11，72. 7%) ，坤泰胶囊组 8 只 ( 8 /12，66. 7%) ，中西药组 9 只 ( 9 /12，75%) 。与正常组比较，模型组 血清 AMH、E2 水 平 显 著 降 低，LH、FSH 水 平 显 著 升 高 ( P＜0. 05) ; 与模型组比较，坤泰胶囊组、中西药组、西药 组 AMH、E2 水平显著升高 ( P＜0. 05) ，中西药组、西药组 FSH、LH 水平显著降低 ( P＜0. 05) 。

4 讨论

雷公藤多苷是一种细胞毒性药物，对机体内分裂增殖 较快的细胞作用明显，导致其 DNA 碱基错配，引起 DNA 链断裂，对卵巢的卵泡细胞有较强毒副作用，近年来被广 泛用于卵巢储备功能下降模型的建立，该方法所需时间短， 成功率高，简便易行，致病途径与人类相同，而且符合模型卵巢组织萎缩，卵泡、黄体数量、卵泡颗粒细胞减少， 炎细胞浸润等特点。造模剂量及时间参照文献 ，以 50 mg /( kg·14 d) 造模最理想。中医并无 “卵巢储备功能下降”这一病名，但可将其 归于 “不孕症”“月经过少”“月经后期” “血枯” “闭经” 等范畴，认为肾藏精，主生殖，肾虚是本病根本病机，肾 虚阴阳失调，影响及心，心不静则肾不实，久而必致肾虚， 心肾子宫轴失调，产生各种复杂病变; 国医大师夏桂成认 为，本病主要病机为 “心肾不交”，主要治法为 “交济心 肾，以调心为主”。坤泰胶囊系由仲景名方 “黄连阿胶汤” 化裁而来，方中熟地、阿胶、白芍、茯苓滋肾阴，养精血， 黄连、黄芩清热泻火，能有效改善因卵巢功能减退而引起 的症状; 现代药理研究表明，方中熟地、白芍具有雌激素 样作用，可升高妇女血清 E2 水平; Huang 等 认 为，坤泰胶囊等中药可能通过调节 GnＲH 分泌来促进卵泡 发育与排卵，改善子宫血流，调节子宫内膜。



 

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