其林贝尔混合器对黄曲霉毒素国际比对结果的分

黄曲霉毒素( aflatoxins，AFs) 主要是由黄曲 霉( Aspergillus flavus) 和寄生曲霉( A． parasiticus) 等真菌产生的一类有毒次生代谢物，在自然界中 广泛存在，侵染包括小麦、玉米、花生、大豆和稻米 等农作物，对人畜有强烈的致病性、致癌性，不仅能够引起急性和亚急性中毒，还能够引起黄疸、贫 血、肝脏损伤以及胃癌、肺癌、结肠癌等，是毒性最 强的真菌毒素。目前发现的黄曲霉毒素共有 20 余种，根据黄曲霉毒素在紫外光照射下产生荧 光颜色的不同，可将其分为 B 族和 G 族两大类及其衍生物，在紫外光照射下，B 族毒素发出蓝色荧 光，G 族毒素发出绿色荧光。植物来源的食物 易受到黄曲霉毒素 B1 ( AFB1 ) 、黄曲霉毒 素 B2 ( AFB2 ) 、黄曲霉毒素 G1( AFG1 ) 和黄曲霉毒素 G2 ( AFG2 ) 的污染。其中 AFB1 的毒性作用最强， 1993 年世界卫生组织( World Health Organization， WHO) 的国际癌症研究机构将 AFB1 列为Ⅰ类致癌物。

1 材料与方法

1. 1 考核样品

考核样品由 FAO 委托 Texas A＆M 大学提供， 4 轮考核均为玉米粉样品，要求测定其中黄曲霉 毒素 B1 含量及黄曲霉毒素总量( B1、B2、G1 和 G2 ) 。100 g 考核样品分别称取，每份 2 g，共称得 样品 50 份，进行提取、净化和测定。正式测定前 先进行预试验。

1. 2 仪器和试剂

ACQUITY UPLC 超高效液相色谱串联三重 四极杆质谱仪( 美国 Waters 公司，Xevo TQS 型) ; 冷冻离心机( 3K15，Sigma 公司) ; 其林贝尔旋涡混合器VORTEX-5; 氮吹仪 ( N-EVAP 型，美 国 Organomation 公 司) ; Waters BEH C18 色 谱 柱 ( 100 mm × 2. 1 mm，1. 7 μm) ; MultiSep 226 固 相 萃 取 柱 ( 北 京 Ｒomer 公 司， 5 mL) ; Milli-Q 型纯水仪( 美国 Millipore 公司) ; 甲 醇、乙腈( Fisher，质谱级) ; 甲酸、乙酸铵( 色谱级， Dikma 公 司 ) ; 氨 水 ( 色 谱 纯，德 国 CNW Technologies GmbH) 。 标准品及同位素内标: AFB1、AFB2、AFG1 和AFG2 的 标 准 混 合 溶 液 ( 北 京 Ｒomer 公 司， 0. 5 μg /mL) ; 13C-黄曲霉毒素 B1( 13C-AFB1 ) 、13C黄曲霉毒素 B2 ( 13 C-AFB2 ) 、13 C-黄曲 霉 毒 素 G1 ( 13C-AFG1 ) 和13C-黄曲霉毒素 G2( 13C-AFG2 ) 的标 准混合溶液( 北京 Ｒomer 公司，0. 5 μg /mL) ，纯度 ＞98%，－20 ℃储存。

1. 3 样品前处理

准确称取玉米粉样品 2 g( 精确至 0. 01 g) ，转 移至 50 mL 的离心管中，加入 100 ng /mL 同位素 内标 100 μL，室温静置 2 h，加入 10 mL 乙腈/水溶 液( 86 ∶ 14，V /V) ，室温下翻转混合 1 h，超声提取 30 min，9000 r /min 离 心 15 min，取 上 清 液，待 净化。 取上清液过 MultiSep 226 净化柱，收集流出 液。准确吸取 5 mL 流出液，在 40 ℃水浴下，氮吹 近干，用 1 mL 初始流动相复溶后，超高速 18000 r /min 下离心 15 min，取上清液于进样小瓶中，待 上机检测。

1. 4 仪器条件

1. 4. 1 液相色谱条件

采用 Waters BEH C18色 谱柱( 100 mm×2. 1 mm，1. 7 μm) ; 柱温 40 ℃ ; 进样 量 5 μL; 流速 0. 35 mL /min; 流动相 A 为 0. 1%甲 酸水溶液，流动相 B 为甲醇，梯度洗脱: 0 ～ 1. 0 min，5% ～ 32% B; 1. 0 ～ 5. 0 min，32% ～ 35% B; 5. 0 ～ 8. 0 min，35% ～ 42% B; 8. 0 ～ 9. 0 min，42% ～ 90% B; 9. 0 ～ 10. 0 min，90% B; 10. 0 ～ 10. 1 min， 90% ～ 5% B; 10. 1 ～ 13. 0 min，5% B。

1. 4. 2 质谱条件

电离模式采用电喷雾正离子 化模式( ESI+ ) ，离子源温度 150 ℃，毛细管电压 3. 0 kV，脱溶剂气温度 500 ℃，脱溶剂气流速 800 L / h，锥 孔 气 流 速 150 L / h，碰 撞 气 流 速 0. 2 mL /min; 多反应监测( MＲM) 模式扫描。

1. 5 比对结果评价方法

采用 Z 评分进行结果评价。Z 评分是 由能力验证的指定值( 或均值) 和能力评定标准 偏差计算的实验室偏倚的标准化度量，按照以下 准则对实验结果进行判定: ∣ Z ∣≤2 表示结果 “满意”，即产生“理想结果”的情况超过 95%; 2＜ ∣ Z ∣＜3 表示结果“有问题或可疑结果”，即产 生“理想结果”的情况约等于 5%，实验室应认真 检查结果偏差较大的原因; ∣ Z ∣≥3 表示结果 “异常值或离群结果”，即产生“理想结果”的情况 大约仅有 0. 1%。

2 结果

样品中黄曲霉毒素 B1 及其总量的含量与样 品的取样范围有关，考核中 2 g 为 1 份子样品，表1 为比对考核中样本中黄曲霉毒素含量的分布 情况。

4 轮次的考核中，组织者要求进行黄曲霉毒 素 B1 和黄曲霉毒素总量( Total AFs) 的测定。由 组织者提供的分析报告显示，每轮次中全球约 100 个实验室参加比对考核，包括国家实验室、区 域实验室及商业实验室等，采用的方法有快速检 测法，高效液相色谱法及高效液相色谱串联质谱 法，参加比对考核的实验室提供了 AFB1 和/或黄曲霉毒素总量的结果。

3 讨论

在对黄曲霉毒素的检测过程中，本实验室总 结了一些实验操作过程中的关键控制点。包括黄曲霉毒素在内的真菌毒素在样品中的 分布是不均匀的，因此在分析过程中取样的代表 性非常重要，往往影响含量的测定结果。2016 年 本实验室首次参加考核，实验室将发放的 100 g 考核样品分别称取，每份 2 g，共称得样品 50 份， 采用考核的测定方法进行提取、净化和测定，结果 显示，不同的取样范围决定了样品中 AFB1 及其 总量的含量分布。表 1 给出了 2016 年第 2 轮次 的样品取样量与含量分布情况。同样，在 2017 年 2 个轮次的考核中，样品的取样份数影响着 AFB1 及其总量的含量分布。为增加测定结果的准确性，在进行样品的检测时应做到对全部的考核样品进行测定。



 

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