水发产品中甲醛快速检测方法分析（QL-866使用）

1 引 言

甲醛(HCHO), 又称蚁醛, 在室温下是一种无色、有刺 激气味的气体, 易挥发, 易溶于水、醇等溶剂。通常甲醛水 溶液(30%~40%)称为福尔马林, 是有刺激气味的无色液体。 甲醛是一种破坏细胞蛋白质的毒性物质, 直接作用于氨基、 巯基和羧基, 生成次甲基衍生物, 从而破坏机体蛋白质和酶, 干扰细胞正常代谢, 起到杀菌和防腐的作用。长期接触低 浓度甲醛, 可能会引起神经系统、免疫系统、呼吸系统和肝 脏的损伤, 出现头昏、乏力、嗜睡、食欲减退、视力下降等 症状。

2 材料与方法

2.1 试剂与仪器

2.1.1 样 品

竹笋、牛肚均购自南京本地超市、银鱼购买于苏州太湖一家水产店, 经 SC/T 3025-2006《水产品中甲醛的测定》高效液相色谱法测试, 本底不含甲醛。

2.1.2 试 剂

氢氧化钾、盐酸、亚铁氰化钾、乙酸锌、冰乙酸、乙二 胺四乙酸二钠、高碘酸钾、4-氨基-3-联氨-5-巯基-1, 2, 4-三氮 杂茂(AHMT)、无水乙酸钠、乙酰丙酮, (分析纯, 国药集团化 学试剂有限公司); 甲醛标准品溶液(浓度为 100 µg/mL, GSB07-3141-2014 104122, 环境保护部标准样品研究所)。

2.1.3 仪器设备

TopPette 手动单道移液器(大龙兴创实验仪器(北京)有 限公司); 其林贝尔QL-866 涡旋混合器(其林贝尔仪器制造有限公司); BPI-B-4 电子天平(深圳市嘉英电子有限公司); TGL-16G 离 心机(上海安亭科学仪器厂); UV-1800D 紫外分光光度计 (上海美谱达仪器有限公司); HH-6 数显恒温水浴锅(国华电 器有限公司)。

2.2 实验方法

2.2.1 试样处理

准确称取试样 1 g(精确至 0.01 g)或吸取试样 1.0 mL, 置于 15 mL 离心管中, 加水至 10 mL, 涡旋提取 1 min, 静 置 5 min, 取上清液作为提取液(如上清液浑浊, 加入 1 mL 106 g/L 亚铁氰化钾溶液和 1 mL 220 g/L 乙酸锌溶液, 涡旋 混匀, 4000 r/min 离心 5 min 或滤纸过滤, 取上清液或滤液 作为提取液)。

2.2.2 测定比色卡法

准确移取提取液 2 mL 于 5mL 离心管中, 加入 0.4 mL 100 g/L 乙二胺四乙酸二钠溶液和 0.4 mL 5 g/L AHMT 溶液, 涡旋混匀后静置 10 min, 再加入 0.1 mL 15 g/L 高碘酸钾溶液, 涡旋混匀后静置 5 min, 立即与标准色阶卡 目视比色, 10 min 内判读结果。进行平行试验, 2 次测定结 果应一致, 即显色结果无肉眼可辨识差异。 AHMT 分光光度法: 前处理同上, 以零管调节零点, 于波长 550 nm 处测定吸光度。 乙酰丙酮分光光度法: 准确移取提取液 2 mL 置于 5 mL 离心管中。于试样管中分别加入 0.2 mL 乙酰丙酮溶液, 涡 旋混匀后沸水浴 5 min, 取出冷却至室温后以零管调节零 点, 于波长 413 nm 处测定吸光度。

2.2.3 标准曲线的建立

用甲醛标准溶液配制成相当于 0、1.0、2.0、4.0、6.0、 8.0、10.0 µg 甲醛含量的标准系列, 同样品按照 AHMT 和 乙酰丙酮的分光光度法的测定步骤检测, 以甲醛含量为横 坐标, 吸光值为纵坐标绘制标准曲线。在线性范围内, 相 关系数 r 2 在 0.9990~0.9999。

2.2.4 标准比色卡的制备

将甲醛标准溶液配制成 0、0.5、1、2、5、10、20 mg/L 浓度的甲醛标准系列工作液, 同样品按照 AHMT 比色卡法 测定, 得到浓度系列为 0、5、10、20、50、100、200(mg/kg或 mg/L)甲醛标准比色卡, 见图 1

2.2.5 产品方法性能指标的测定

以银鱼、牛肚和竹笋为代表的空白基质样品, 添加甲 醛标准溶液, 分别制成 0 mg/kg(空白)、5 mg/kg[检测限 (limit of detection, LOD)]、10 mg/kg(2 倍 LOD)、20 mg/kg (4 倍 LOD)4 个添加水平的样本的样本各 50 份, 按前处理 方法和检测步骤进行测定。

2.2.6 交叉反应

以银鱼为代表的空白基质样品, 分别加入乙醛、丙 醛、丁醛、苯甲醛、水杨醛、甲醇、乙醇等标准溶液, 制 备成添加水平为 0、5、10、20、30、40、50、100、200 mg/kg 的系列样品, 按优化后的前处理方法和检测步骤进行测定, 考察试剂盒与上述化合物的交叉反应。交叉反应率 (cross-reactivity, CR%)的计算见式(1): CR%=(甲醛最低检出限/其他物质最低检出限)×100% (1)

3 结果与分析

在水发产品中, 甲醛以游离态和结合态 2 种形式存 在, 考虑到结合态甲醛要加入磷酸或硫酸加热分解、蒸 馏才能进行测定, 不符合快检的要求, 因此, 样品前处理 方法的研究主要针对游离态甲醛。加入蛋白沉淀剂(220 g/L 的乙酸锌溶液+106 g/L 的亚 铁氰化钾溶液)可能会对甲醛进行吸附和对 AHMT 方法的 显色产生影响, 因此对加入蛋白沉淀剂进行实验。称取 1 g 银鱼 10 份于 20 个离心管中, 各加浓度为 50 μg/mL 的甲醛 标准品溶液 2 mL, 将 20个离心管分成 2 组, 每组 10个, 一 组加入水 6 mL, 再加入 1 mL 试剂乙酸锌溶液和 1 mL 亚铁 氰化钾溶液; 另一组加入 8 mL 水。之后 2 组同时经涡旋提 取和离心后, 取上清液 2 mL 按 AHMT 分光光度法和乙酰 丙酮分光光度法测定吸光度, 比较吸光度的变化。结果表 明加入蛋白沉淀剂吸光值变化不大, 不会对甲醛进行吸附 和显色产生影响。乙酰丙酮法: 准确移取 2 mL 10 μg/mL 甲醛标准溶液 于 5 mL 离心管中, 加入 0.2 mL 乙酰丙酮溶液, 涡旋混匀 后, 沸水浴中反应一定时间, 取出冷却至室温, 将显示溶 液置于 1 cm 比色皿中, 以空白液为参比调零, 于 413 nm 测定吸光度值。沸水浴时间和吸光度值变化见图 6。当沸 水浴时间为 5 min 时, 颜色反应达到最深, 之后不再增大, 因此, 选取 5 min 作为沸水浴时间。

4 结 论

甲醛是水果、蔬菜、畜禽肉、鱼、甲壳类动物等食品 中天然存在的成分。大多数食品中天然存在的甲醛含量较 低, 不会对健康造成危害, 但是人为添加、用甲醛溶液浸 泡食品、容器污染等途径引入到食品中的甲醛的含量一般 会较高, 会危害消费者健康。因此, 本方法适用于水发 产品中甲醛的快速测定, 但并不能区分水发产品中甲醛 的来源, 所以判断水发产品中甲醛是否超标, 应该根据 相应的国家限量标准或方法。海水类水产品在冷冻储存 过程中, 其肌肉中的氧化三甲胺容易在酶的作用下分解 成二甲胺和甲醛, 因此甲醛作为代谢中间产物普遍 存在。虽然国家明令禁止在食物中人为添加甲醛, 但判 定一种食品中是否人为添加非食品原料甲醛, 应当扣 除食品原料中的原生质本底量。由于不同种类水产品 中甲醛含量差异较大, 建议对常见的不同区域、不同品 种、不同季节的水产品中甲醛的本底做系统分析, 根据实 际情况进行判定。



 

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