LC-MS/MS测定人血清中奥卡西平(QL-861使用)

奥卡西平(oxcarbazepine，OXC)是一种抗癫痫 药和抗惊厥药，适用于治疗原发性全面性强直-阵 挛发作和部分性发作，伴或不伴继发性全面发作，此外还可用于治疗三叉神经痛等。OXC 在服用后， 迅速且几乎完全被肝脏中芳香酮还原酶降解为药 理活性 代谢产物 10-羟基卡马 西平 (metabolite10-hydroxycarbamazepine，MHD)，OXC 的血清半 衰 期 为 1.3~2.3 h ， MHD 的 血 清 半 衰 期 为 (9.3±1.8)h。

1 仪器与试剂 

ACQUITY I-S 超高效液相色谱串联质谱仪(美 国 Waters 公司)；MS-105DU 型电子天平(梅特勒托 利多仪器上海分部)；MulLifuge.XIR 高速冷冻离心 机(德国 Thermo 公司)；其林贝尔QL-861 型涡旋仪(海门市其林贝尔仪器制造有限公司)。 乙腈、甲醇(色谱纯，德国默克公司)；甲酸(色 谱纯，ANAOUR CHEMICALS SUPPLY)；药品： OXC( 中国食品药品检定研究院 ， 批 号 ： 100657-201102；含量：99.8%)；MHD(大连美仑生 物技术有限公司，批号：29331-92-R；含量：98%)； 内标：卡博替尼(Ark Pharm 公司，批号：RSC181； 含量：99.8%)。空白血清由温州医科大学附属第一 医院检验科提供。 

2 方法与结果 

2.1 色谱条件与质谱条件

色 谱 条 件 ： 色 谱 柱 为 Waters BEH C18(2.1 mm×150 mm，1.7 µm)，柱温 40 ℃，流动 相为 0.1%甲酸(A)-乙腈(B)。梯度洗脱，0~1.0 min， 60%A；1.0~1.5 min，60%→30%A；1.5~ 2.0 min， 30%A；2.0~2.5 min，30%→60%A；2.5~ 3.0 min， 60%A。流速为 0.3 mL·min−1，进样体积 1 µL。质 谱条件：电喷雾离子化正离子 MRM 检测模式。 OXC及MHD的检测离子对分别为OXC[M-H+ ]m/z253.2→180.1，MHD[M-H+ ]m/z 255.3→194.2。 

2.2 溶液的配制 

精密称取 OXC 10.00 mg 置于 10 mL 量瓶，用 甲醇溶解配成 1 mg·mL−1 的 OXC 溶液，同理分别 配制 1 mg·mL−1 的 MHD 溶液、卡博替尼溶液。将 OXC、MHD 溶液混合配制成同时含有 20 µg·mL−1 OXC 和 800 µg·mL−1 MHD 的对照品溶液，卡博替 尼溶液稀释成 200 ng·mL−1 作为内标。上述溶液均 放置−80 ℃冰箱保存。对照品溶液分别稀释成 6 个浓度标准曲线工作液，使得 OXC 浓度分别为 0.2，1.0，2.0，5.0，10.0，20.0 µg·mL−1，MHD 浓 度分别为 8，40，80，200，400，800 µg·mL−1。 

2.3 血清样本处理 

取 血 清 样 本 100 µL， 加 入 10 µL 内 标 (200 ng·mL−1 的卡博替尼)，涡旋混匀 30 s，再加入 300 µL 乙腈沉淀蛋白，涡旋混匀 30 s，离心 (13 000 r·min−1 )10 min，取上清液加至进样瓶中， 1 µL 进样分析。 

2.4 标准曲线的测定与定量下限 

取 7 个 EP 管，1 个空白血清对照，其中 6 个 分别加入 5 µL 6 个浓度的标准曲线工作液，分别 加入 95 µL 空白血清，使得 OXC 的血药浓度为 0.01，0.05，0.10，0.25，0.50，1.00 µg·mL−1，MHD 的血药浓度为 0.4，2.0，4.0，10.0，20.0， 40.0 µg·mL−1，涡旋 30 s，按照“2.3”项下方法操 作后进样分析，分别以 OXC、MHD 与内标的峰面 积比为纵坐标(Y)，质量浓度为横坐标(X)，进行线 性回归得 OXC、MHD 的标准曲线方程分别为 Y=0.152 444X−0.497 848，r 2=0.995 8；Y= 0.013 467 9X+18.216，r 2=0.996 2，表明 OXC、MHD 血药浓度分别在 0.01~1 µg·mL−1，0.4~40 µg·mL−1 内线性关系良好，定量下限分别为 0.01 ， 0.4 µg·mL−1。 2.5 专属性试验 分别将空白血清，添加 OXC、MHD 对照品溶 液的空白血清，服用 OXC 的患者血清按照“2.3” 项下血清样本处理方法进行操作，记录色谱图， 结果见图 1。结果显示，OXC、MHD 在本实验色 谱条件下保留时间分别约为 1.25，0.98 min，与内 标卡博替尼完全分离，测定结果不受血清内源性 物质干扰，说明本方法专属性强，适用于测定 OXC、MHD 的血药浓度。

3 讨论 

近年来，质谱技术除了广泛应用于食品检测、 环境监测、生命科学研究，在临床检测应用领域 中的作用也越来越重要，如维生素 D 和激素的检 测、新生儿遗传代谢疾病筛查、药动学研究、治 疗药物浓度监测等。目前，临床上应用最先进、 最广泛的质谱技术是 LC-MS/MS。该技术将高效 分离和高灵敏度的检测合二为一，分析的目标化 合物范围广(极性和非极性)，快速方便，大大减少 假阳性几率，有效降低经济成本。

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