大鼠肺内的组织分析（其林贝尔涡旋仪使用）

慢性阻塞性肺病( chronic obstructive pulmonary disease，COPD) 是一种以气流受限为主要特 征的慢性肺部疾病。最初表现为用力时的呼 吸困难。随着病情加重，患者会在休息时也感到 呼吸困难，严重时会威胁至患者生命。据报道， 2015 年全球约有1. 75 亿成年人患有 COPD，其 中每年约有 320 万人死于 COPD，是致死率排名 第四的疾病。随着环境污染的加剧和吸烟人 口的增加，COPD 的患者数量仍在快速增长，预计 至 2030 年，致死率将上升至第三位。

1 仪器与材料

高效液相色谱系统: 5410 紫外吸收检测器、 5310 色谱柱恒温箱、5210 自动进样器、5220 泵 ( 日立( 中国) 有限公司) ，Thermo BDS HYPEＲSIL C18色谱柱( 250 mm × 4. 6 mm，5 μm，赛默 飞世尔( 中国) 科技有限公司) ，FＲITSCH6 型行 星式球磨机( 德国 Fritsch 公司) ，Büchi B 290 型 Mini 喷雾干燥仪( 瑞士 Büchi 实验技术有限公 司) ，FＲESCO21 型冷冻离心机( 赛默飞世尔( 中 国) 科技有限公司) ，涡旋仪( 海门市其林贝尔仪器制 造 有 限 公 司) ，MicroSprayer  AerosolizerModel IA-1C、Dry Powder Insufflator TM -Model DP4、Model LS-2-Ｒ( 美国 Penn-Century 公司) 。 布地奈德( budesonide，BUD，湖北葛店人福 药业有限责任公司) ，普朗尼克( F68，巴斯夫中国 有限公司) ，透明质酸钠( sodium hyaluronic，HA， 含量质量分数≥ 96. 8，重均分子质量为 1470 ku， 数均分子质量为 703 ku，山东福瑞达生物医药有 限公司) ，筛分乳糖( Ｒespitose SV003，荷兰 DFE Pharma 公司) ，布地奈德粉吸入剂( pulmicort turbuhaler，瑞典 Astra Zeneca 公司) ，醋酸曲安奈德 ( 武汉东康源科技有限公司) ，注射用生理盐水 ( 色谱纯，吉林省都邦药业股份有限公司) ，乌拉 坦( 分析纯，天津市凯信化学公司) ，甲醇( 色谱 纯，天津市康科德科技有限公司) ，冰醋酸( 分析 纯，天津市富宇精细化工有限公司) ，乙酸乙酯 ( 色谱纯，山东禹王和天下新材料有限公司) 。 健康 SD 大鼠 15 只，雄性，体质量为 180 ～ 220 g，沈阳药科大学动物实验中心，质量合格证 号: 211002300029072，使用许可证号: SYXK( 辽) 2014 0004。 

2 方法 

2. 1 色谱条件 

色谱柱: Thermo BDS HYPEＲSIL C18 ( 250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ，流动相: 甲醇 pH 3. 2 的醋酸水 溶液( 体积比为 72∶ 28) ，流速: 1. 0 mL·min － 1 ，检 测波长: 254 nm，柱温: 40 °C，进样量: 20 μL，内 标: 醋酸曲安奈德。 

2. 2 溶液的配制 

2. 2. 1 布地奈德储备溶液 

取布地奈德对照品约 25. 0 mg，精密称定，置于 50 mL 量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇 匀，得质量浓度为 500 mg·L － 1 的布地奈德储备 溶液。 

2. 2. 2 布地奈德系列标准溶液 

分 别 精 密 量 取 2. 00、1. 00、0. 40、0. 20、 0. 10 mL布地奈德储备溶液，置于 100 mL 量瓶 中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得质量浓度分别为 10. 0、5. 0、2. 0、1. 0、0. 5 mg·L － 1 的布地奈德系列 标准 溶 液。精 密 量 取 1. 00 mL 质 量 浓 度 为 2. 0 mg·L － 1 的标准溶液，置于 10 mL 量瓶中，加 甲醇稀释至刻度，即得质量浓度为 0. 2 mg·L － 1 的 标准溶液。 

2. 2. 3 内标溶液 

取醋酸曲安奈德标准品约 10. 0 mg，精密称 定，置于 50 mL 量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻 度，摇匀，得质量浓度为 200 mg·L － 1 的醋酸曲安 奈德 储 备 溶 液。精 密 量 取 1. 00 mL 醋 酸 曲 安 奈德储备溶液，置于 50 mL 量瓶中，加甲醇稀释 至 刻 度，摇 匀，即 得 内 标 溶 液 ( 质 量 浓 度 为 4. 0 mg·L － 1 ) 。 

2. 3 肺组织样品的处理 

大鼠处死后迅速解剖，在气管第一环节处将 其剪断，取出带有完整气管的肺组织( 此过程在 5 min内完成) ，生理盐水洗去表面的血渍，滤纸擦 干，将肺叶铺展于干燥的表面皿内，用钝器轻轻地 对肺叶进行密集的横切操作，然后将肺泡从细支 气管慢慢刮下( 细支气管有韧性，不易被切断或 刮断) ，最后用手术剪分别将细支气管、支气管和 气管剪开，分离成气管、支气管、左细 支气管、右细支气管、左肺泡、右肺泡6 个部分， 于 － 20 °C 下冷冻保存，待处理。

3 讨论 

布地奈德是一种具有局部抗炎作用的糖皮质 激素。用于 COPD 治疗时，其主要的作用部位为 末端细支气管。因此，吸入的布地奈德制剂最 理想的状态是能够较多地沉积在末端细支气管， 利于其进一步的发挥疗效。本文作者将肺部组织 分离成气管、支气管、左右细支气管、左右肺泡等 6 个部分，考察了 3 种处方的布地奈德经气管内 给药后在肺组织的分布。结果显示，BUD-NEM 在细支气管分布最多，BUD-NC 次之，而 BUD-PT 主要沉积在气管、支气管部位，在细支气管分布最 少。这可能是因为与市售药相比，BUD-NEM 的 空气动力学粒径相对较小，大部分粒子能够到达 气道深处，将更多的布地奈德递送至靶部位，同 时，其黏附性可增加布地奈德在靶部位的滞留时 间，使其更好的发挥局部药效。

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