漩涡混合器在输车辆消毒效果的评估中的使用

众所周知，动物无害化处理工作是动物疫病防 控的最后一道关口，是保障食品安全和公共卫生安 全的重要 举 措。作为动物无害化处理工作的重要 环节，运 输 车 辆 的 消 毒 显 得 尤 为 重 要。很 多 情 况 下，动物无害化处理厂确实是对运输车辆进行了消 毒，但消毒效 果 如 何 却 无 从 得 知，是否有致病微生 物残留也不可知。一旦发生消毒剂保存不当、消毒 浓度配制不 合 理、预制消毒溶液失效等问题，特 别 是在重大动 物 疫 病 如 非 洲 猪 瘟、禽流感流行期间， 消毒效果得不到保障，将对动物疫病防控造成严重 后果。本研究主要从细菌杀灭率、病毒杀灭情况两 个方面对运输车辆消毒效果进行综合评估，为开展 相关工作提供数据支撑。

主要成分为月苄三甲氯铵，购自上海骑骠动物保健品公司，用于运输车辆冲 洗 消 毒；益欧迪复合消毒药，主要成分为癸甲溴铵、碘，购自上海康利得动物药品有限公 司，用于运输 车 辆 喷 雾 消 毒；消毒溶液浓度均按照 推荐浓度配比使用。

本文所指运输车辆为新型动物 无害化收集转运特种车辆，该车辆在全国动物无害 化处理领域内率先被国家工信部批准为特种车辆， 并配备 了 消 毒 喷 雾 设 施、ＧＰＳ定 位 系 统、车 辆 行 车 跟踪记录系统、防污水泄漏装置等。

ＰＣＲ仪、水平凝胶电泳仪、凝 胶 成 像 系 统 （Ｂｉｏ－ｒａｄ，型 号 ＧｅｌｄｏｃＥＺ）、 高 速 冷 冻 离 心 机（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，型 号 ＰｒｉｍｏＲ）、 生 物 安 全 柜（ＥＳＣＯ，型 号 ＡＣ２－４Ｓ１）、超 净 工 作 台 （苏 净 安 泰，型 号 ＳＷ－ＣＪ－１Ｆ）、隔 水 式 恒 温 培 养 箱（上海精宏实验设备有限公司，型 号 ＧＮＰ９０５０）、 漩 涡 混 合 器 （海门其林贝尔仪器制造 有限公司， 型 号 ＶＯＲＴＥＸ－５）。

猪圆环病毒２型（ＰＣＶ２）毒株由上海 创宏生物科技有限公司提供，病毒 ＰＣＲ阳性对照由 捷瑞生物工 程 有 限 公 司 合 成；病 毒 提 取 试 剂 盒、其 他相关 试 剂 购 自 天 根 生 化 科 技 （北 京）有 限 公 司； ０．８５％生理盐 水（含 中 和 剂）采 样 管 购 自 友 康 恒 业 生物科技（北京）有限公司；平板计数琼脂购自青岛 海博生物技术有限公司。

运输车辆驶离动物无害化处理 厂前，需要进行冲洗消毒和喷雾消毒。冲洗消毒使 用月苄三甲氯铵溶液，每次冲洗消毒时水流均完全 覆盖车厢内外表面，至少３次；喷雾消毒使用益欧迪 复合消毒药，６８对雾化喷头喷雾，喷雾时间３０ｓ，雾 粒直径为５０～６０μｍ，雾粒完全覆盖运输车辆车厢 外表面（包括车厢顶部）。

（１）采 样 时 间：运 输 车 辆 驶 入 动 物 无 害化处理厂 大 门 前，对 其 车 厢 外 表 面 进 行 采 样；卸 货完毕，冲洗消毒前，对车厢内表面进行采样；冲洗 消毒和喷雾消毒后，运输车辆驶离动物无害化处理 厂大门前，对其车厢内、外表面进行采样。

（２）采样 方法：用 ５ｃｍ×５ｃｍ 的标准灭菌规格板，放在被检 车厢表面，连续采样４个，内、外表面采样面积均为 １００ｃｍ２，用浸有含相应中和剂的无菌生理盐水棉拭 子１支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各５次，并随 之转动棉拭子，将棉拭子投入１０ｍＬ含相应中和剂 的无菌生理盐水采样管内，立即送检。

本报告选取１辆死亡动物运输车 辆驶入前、消毒前、驶离前监测样品，漩涡混合器震 荡混匀２０ｓ后，使 用 １ ｍＬ 微量移液器吸取样品１ｍＬ，沿管壁缓缓注入盛有９ｍＬ 无菌生理盐水的 试管中，震荡试管混合均匀，制成１∶１０样品匀液，以 此类推，分别将样品１∶１００、１∶１０００、１∶１００００…… 进行１０倍递增稀释，每个稀释度吸取１ｍＬ样品匀 液于无菌平皿内，每个稀释度做２个平皿，同时，分 别吸取１ｍＬ空白稀释液加入２个无菌平皿内作为 空白对照。及时吸取１５～２０ｍＬ冷却至４６ ℃的平 板计数琼脂 培 养 基倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。待 琼脂凝固后，将平板翻转，（３６±１）℃培养（４８±２）ｈ， 取出进行 细 菌 计 数。本次样品中可能含有在琼脂 表面弥漫生长的菌落，因此可在凝固的琼脂表面覆 盖一薄层琼脂培养基（约４ｍＬ），凝固后翻转平板， 按照上述条件进行培养。

本报告选取１辆死亡动物运输车辆监测细菌杀 灭情 况，结果表明该车 辆内表面细菌杀灭率 ≥ ９０％，具体见表２、表３。

３ 结果分析
　　

从细菌杀灭率、病毒杀灭情况两个 方面对运 输 车 辆 消 毒 效 果 进 行 综 合 评 估。从 样 品 的监测结果来看，死亡动物运输车辆驶入动物无害化处理厂直至离开，经过卸货、消毒，车辆外表面细 菌杀灭率≥９０％，确保了该类车辆在城市道路行驶 期间的公共卫生安全；同时本研究对车厢内表面病 毒残留进行 监 测，发现在未经消毒情况下，车 厢 内 表面血污水污染较为严重，采集样品中发现 ＰＣＶ２ 阳性，经过消 毒 处 理 达 到 ＰＣＶ２ 阴性，确 保 了 该 车 辆在养殖场、收集点等需要打开车厢进行装卸病死 动物过程中不会造成病原扩散。 运输车辆可能携带的致病微生物必须引起重 视。运输 过 程 中，由 于 病 死 动 物 个 体 太 大 无 法 包 装、包装物不密封、血污水渗漏等原因，导致运输车 辆车厢污 染 较 为 严 重。笔者对车厢内表面消毒前 血污水样品进行调查，发现血污水中可能残留有大 量的致病 微 生 物。本 研 究 选 取 ＰＣＶ２ 作为 特 定 病 原微生物对运输车辆消毒效果进行判定，旨在引起 行业内相关工作人员对运输车辆消毒效果评估的关注。