三重四极杆质谱法同时测定巴氏杀菌乳中9种香精

巴氏杀菌乳是仅以生牛（羊）乳为原料，经巴氏 杀菌等工序制得的液体产品。近年来乳品工业 迅猛发展，市场上销售的巴氏杀菌乳品种、规格颇 多。部分乳品企业为提高产品的“香”、“浓”，会使 用香精等添加剂来增强口味。我国现行的食品安全 国家标准 ＧＢ 2760－2014《食品添加剂使用标准》对 巴氏杀菌乳做了明确规定，不得添加任何香精香料， 但目前尚缺乏相应的检测方法标准，导致监管缺项。

1 实验方法

1．1 仪器、试剂与材料

7890Ａ ／ 7000Ｃ 气相色谱－三重四极杆质谱仪（配 备自动进样器和电子轰击电离源，美国 Ａｇｉｌｅｎｔ 公 司），数据采集由 ＭａｓｓＨｕｎｔｅｒ 完成；ＶＯＲＴＥＸ ＫＢ－3 涡旋振荡器（江苏海门其林贝尔仪器制造有限公 司）；3－30Ｋ 高速冷冻离心机（德国 Ｓｉｇｍａ 公司）。 9 种香精标准品：二氢香豆素、香兰素、香豆素、 乙基香豆素、甲基香豆素、7－甲基香豆素、7－甲氧基 香豆素、7－乙氧基－4 甲基香豆素和环香豆素（纯度＞ 96％，日本 ＴＣＩ 公司）。乙醇、甲醇、乙腈和丙酮（美 国 Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ 公司）；乙二胺－Ｎ－丙基甲硅烷 （ＰＳＡ）（德 国 Ｓｉｇｍａ 公 司）；十八烷基键合硅胶 （Ｃ18）（美国 Ａｇｉｌｅｎｔ 公司）；硫酸镁、无水硫酸钠 （成都市科龙化工试剂厂）。

1．2 标准溶液的配制

准确称取 9 种香精标准品（10. 0±0. 1）ｍｇ，分 别置于 10 ｍＬ 容量瓶中，加入少许无水乙醇混匀， 待标准品溶解，再加入乙醇定容至 10 ｍＬ，可得 1 ｍｇ ／ ｍＬ 的标准储备液，于－20 ℃冰箱中储存待用。 分别精密移取各标准储备液 100 μＬ，置于 10 ｍＬ 容量瓶中，用乙醇稀释并定容至 10 ｍＬ，可得 10 μｇ ／ ｍＬ 混合标准溶液，于 4 ℃冰箱中储存待用。

1．3 样品前处理

准确称取液体巴氏杀菌乳 1 ｇ，置于 50 ｍＬ 离 心瓶中，加入 15 ｍＬ 无水乙醇，涡旋 1 ｍｉｎ，低温离 心（4 ℃，8 000 ｒ ／ ｍｉｎ）5 ｍｉｎ，取 1 ｍＬ 上清液，用 0. 22 μｍ 尼龙滤膜过滤后，上机检测。

1．4 基质标准溶液的配制

分别称取不含目标物的空白巴氏杀菌乳样品 1 ｇ（精确至 0. 01 ｇ），按 1. 3 节方法进行预处理得到基质提取液。用基质提取液作为稀释溶剂制备基质 标准溶液。

1．5 ＧＣ－ＭＳ 条件

色谱柱：ＤＢ－5ＭＳ 柱（30 ｍ × 0. 25 ｍｍ × 0. 25 μｍ，美国 Ａｇｉｌｅｎｔ 公司）；进样口温度：250 ℃；进样 方式：不分流进样；载气：氦气（≥99. 999％）；流量： 1. 0 ｍＬ ／ ｍｉｎ。程序升温：初始温度 80 ℃，保持 2 ｍｉｎ，以 10 ℃ ／ ｍｉｎ 的速率升温至 170 ℃，保 持 1 ｍｉｎ，以 60 ℃ ／ ｍｉｎ 的速率升温至 270 ℃，保持 10 ｍｉｎ。进样量：1. 0 μＬ。 色 谱－质 谱 接 口 温 度：280 ℃；电 子 轰 击 电 离 （ＥＩ）源；电子能量：70 ｅＶ；多反应监测（ＭＲＭ）模 式；溶剂延迟：4 ｍｉｎ。9 种香精化合物的名称、保留 时间和质谱参数见表 1。


2 结果与讨论

升温程序是实现化合物分离非常重要的气相色 谱参数，本实验考察了在升温的第一阶段不同升温 速率（5、10 和 20 ℃ ／ ｍｉｎ）对化合物分离效果的影响。当第一阶段升温速度为 20 ℃ ／ ｍｉｎ 时，二氢香 豆素和香兰素保留时间相近，两个化合物难以分开； 采用 10 ℃ ／ ｍｉｎ 和 5 ℃ ／ ｍｉｎ 两种升温速率可实现 2 种化合物的良好分离，考虑到节约时间，升温速率最 终选择 10 ℃ ／ ｍｉｎ。三重四极杆质谱条件的优化参数一般包括母离 子、子离子以及碰撞能量等。在 ＭＲＭ 参数优化过 程中，先通过全扫描模式选取质荷比较大且相对丰 度较高的特征碎片作为母离子，然后将母离子进一 步裂解，选取 2 ～ 3 个离子作为子离子，最后对每一 对母离子／ 子离子以响应信号大小为依据优化碰撞 能量。

3 结论

本研究采用直接提取－低温高速离心净化结合 ＧＣ－ＭＳ ／ ＭＳ，通过优选提取溶剂、提取溶剂体积和仪器参数，建立了快速定量测定巴氏杀菌乳中 9 种香 精成分的分析方法。方法学评价和实际样品检测结 果表明，该方法操作简便，灵敏度高，净化效果较好， 可用于巴氏杀菌乳中多种香精的检测。