盐酸特拉唑嗪片在健康人体的生物等效性研究

盐酸特拉唑嗪( terazosin) 片为第二代选择性 α1-肾上腺素受体阻滞剂，由美国雅培公司开发成 功，1985 年在德国首次上市，1987 年 8 月 7 日获 FDA 批准后，已在美国、欧洲及日本等国已广泛用 于临床，商品名高特灵，用于治疗高血压和良性前列 腺增生。

1 材料与方法

1. 1 药品与试剂

受试药品: 盐酸特拉唑嗪片［规格: 2 mg( 按二水合特拉唑嗪计) ，批号: 070301，贵州威门药业股 份有限公司］。参比药品: 高特灵［盐酸特拉唑嗪 片，规格: 2 mg( 按特拉唑嗪计) ，批号: 36582VA，英 国雅培制药有限公司］。盐酸特拉唑嗪对照品( 中 国药品生物制品检定所，纯度 99. 3% ) 。内标甲磺 酸多 沙 唑 嗪 对 照 品 ( 浙江省药品检验所，批 号 20040701，纯度: 99. 1% ) 。甲醇、乙腈为色谱纯; 甲 酸铵、甲酸为分析纯; 双蒸水( 新鲜 Milli-Q 超纯水) 。 空白血浆( 浙江大学医学院附属第一医院输血科) 。

1. 2 仪器

Agilent ＲＲLC1200 高效液相系统，6410 Triple Quad LC-MS /MS 三重四极杆质谱仪，配有电喷雾离 子 源 ( ESI ) 以 及 Agilent Mass Hunter 工 作 站 B. 01. 00( 美国 Agilent 公司) 。 液质系统: Agilent ＲＲLC1200，6410 Triple Quad LC-MS /MS 三重四极杆质谱仪( 美国 Agilent 公司) ; QL － 901 旋涡振荡仪( 其林贝尔仪器制造公司) ; JAC ultrasonic 4020 超声仪( 上海君翼仪器设备有限公司) ， Adventurer AＲ1140 电子天平( 美国 OHAUS 公司) ，Eppendorf 5417c 离心机( 德国 EPPＲNDOＲF 公司) 。

1. 3 色谱与质谱条件

色谱柱: ZOＲBAX SB-C18 ( 3. 0 mm × 150 mm，3. 5 μm) ; 流动相: 甲醇-10 mmol·L － 1甲酸铵水溶液( 78∶ 22，V/V) 用甲酸调 pH 值至 4. 14; 流 速: 0. 34 mL· min － 1 ; 柱温: 20 ℃; 采用大气压电喷雾离子源( ESI) ，多 重反应选择离子监测( MＲM) ，正离子模式; 离子源雾化 气温度: 350 ℃; 雾化气压力: 310. 28 kPa; 反吹气流量 9 L·min － 1 ; 毛细管电压4 000 V; fragment 为120 V，EMV 为300 V; 特拉唑嗪及内标碎片电压分别为 30、30 V; 进 样量 10 μL; 特拉唑嗪母离子及子离子为 m/ z 388. 2/ 290. 1; 内标多沙唑嗪母离子及子离子为 m/ z 452. 0/ 344. 1。

1. 4 研究对象

试验方案经浙江大学医学院附属第一医院伦理委 员会批准。18 例健康男性受试者，平均年龄为( 22. 80 ± 1. 70) 岁，平均体重为( 61. 30 ± 6. 07) kg，平均身高 ( 169. 95 ± 4. 28) cm; 无心、肝、肾、消化道、神经系统、内 分泌系统及骨骼肌肉等病史; 经一般体格检查、血、尿 常规化验、血清学功能检查，均属正常; 心、肺、腹部叩、 触诊、听诊无异常发现，浅表淋巴结无肿大，甲状腺无 肿大，并且无其他阳性体征发现; 十二导联心电图等检 查项目结果正常; 受试者均自愿签署知情同意书。

1. 5 给药方案与血样采集

本试验按随机、开放、双周期自身交叉试验设计。18 例男性健康受试者随机分为2 组，一组受试者先给 予参比制剂，另一组给予受试制剂，经中间清洗期( 1 周) 后进行交叉给药。服药前禁食 10 h 以上，次日晨 空腹服用受试制剂或参比制剂，温开水 250 mL 送服。 服药后 2 h 内不饮水，给药后 4 h 给予统一标准餐。 18 例受试者均完成全部试验。受试制剂和参比制剂 的剂量均为 2 mg。于服药前和服药后 0. 25、0. 5、 0. 75、1、1. 5、2、3、4、6、8、12、24、36、48 h 分别从上肢静 脉取血4 mL，置于肝素抗凝试管中，以 4 000 r·min － 1 离心15 min，分离血浆，置于 － 70 ℃冰箱中冻存。

2 结 果

本实验考察了来源于 6 个不同个 体的空白生物样品。空白血浆、空白血浆加内标、空 白血浆加特拉唑嗪标准溶液及受试者服药后 2 h 血 浆样品的典型色谱见图 1。由图 1 可见，特拉唑嗪 和内标多沙唑嗪的保留时间分别约为 2. 72 和 3. 41 min。待测物和内标出峰处均无杂峰干扰，血浆内源 性基质不干扰待测物及内标的测定，方法具有很好 的特异性。精密量取对照品储 备液适量，加甲醇分别稀释制成每 1 mL 中含特拉唑 嗪 3、12、30、60、120、300、600、1 200 ng 的溶液，分别 精密量取 20 μL，加入空白血浆 180 μL，混旋 30 s， 配制 成 质 量 浓 度 0. 3，1. 2，3. 0，6. 0，12. 0，30. 0， 60. 0，120. 0 ng·mL － 1的特拉唑嗪对照品血浆，精密 加入内标溶液 20 μL 及沉淀剂( 乙腈-甲醇-甲酸 = 4∶ 1∶ 0. 1) 500 μL，混旋 1 min，13 000 r·min － 1，离心 5 min，取上清液进样 10 μL。以特拉唑嗪子离子 ( m / z 290. 1) 质谱峰面积与内标子离子( m / z 344. 1)质谱峰面积的比值( Y) 对样品浓度( ρ) 进行线性回 归，得工作方程。在 0. 3 ～ 120. 0 ng·mL － 1内，采用 加权( 1 /ρ 2 ) 最小二乘法进行线性回归，其标准曲线 回归方程为: Y = 0. 374 6ρ + 0. 007 5，r 2 = 0. 997 7，定 量下限为 0. 3 ng·mL － 1。

3 讨 论

本试验建立了测定人血浆中特拉唑嗪的 LCMS /MS 方 法，用 沉 淀 剂 ( 乙 腈-甲 醇-甲 酸 = 4 ∶ 1 ∶ 0. 1) 沉淀蛋白、甲磺酸多沙唑嗪为内标，方法灵敏 度高，准确度和精密度符合要求，适用于盐酸特拉唑 嗪片的药动学和生物利用度研究。 本试 验 所 得 的 主 要 药 动 学 参 数 与报道基本一致。18 例健康受试者按自身前 后交叉分别口服盐酸特拉唑嗪片受试制剂和参比制 剂 2 mg 后，两制剂特拉唑嗪主要药动学参数 ρmax、 AUC0-t及 AUC0-∞ 经对数转换后进行多因素方差分析 ( ANOVA) ，两制剂在给药周期及制剂间均无显著性 差异( P ＞ 0. 05) ; 在 α = 0. 05 水平上行双单侧 t 检 验，受试制剂与参比制剂中 ρmax 和 AUC0-t 的几何均 数比的 90% 置信区间均落在 80. 00% ～ 125. 00% 内，可认为受试制剂和参比制剂在空腹状态下具有 生物等效性，临床上可替换使用。 试验过程中，发生了头晕、晕厥、小便失禁等不 良事件。可能是由于药物引起的体位性低血压，亦 可能与受试者紧张，清晨空腹有关。在服药开始后 研究者密切观察，并嘱咐受试者起卧缓慢。试验期 间未发生严重不良事件，盐酸特拉唑嗪片在健康受 试者中的安全性较好。