血清炎症细胞因子的影响分析

变应性鼻炎（ａｌｌｅｒｇｉｃｒｈｉｎｉｔｉｓ，ＡＲ）是机 体 接 触 变应原后由免疫球蛋白 Ｅ（ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎＥ，ＩｇＥ） 介导的鼻黏膜非感染性慢性炎症性疾病，其典型症 状为阵发性喷嚏、鼻痒和鼻塞、流涕等。ＡＲ 的发 病机制复杂，现代研究认为其主要是免疫调节细胞 Ｔｈ１与 Ｔｈ２比例 失 衡 引 起 的 变 应 性 炎 症 疾 病。当 Ｔｈ１细胞 释 放 的 干 扰 素－γ（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－γ，ＩＦＮ－γ）等 细胞因子不足时，Ｔｈ２细胞会出现亢进现象，产生大 量的 白 细 胞 介 素－４（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－４，ＩＬ－４）等 细 胞 因 子，从而引 起ＩｇＥ 过 量，引 起 ＡＲ。目前 临 床 治 疗 ＡＲ的药物种类有糖皮质激素类、抗组胺类、抗白 三烯类等，其中抗组胺类药物具有良好的安全性、较 少的不良反应等优点而成为临床常用药，如氯雷他 定、依巴斯汀。

１ 材料

１．１ 动物及分组

ＳＰＦ级豚鼠７０只，体质量２００～ ２４０ｇ，购于南京市江宁区青龙动物繁殖场［生 产 许 可证号：ＳＣＸＫ（苏）２０１２－０００８］。将豚鼠随机分为正 常组，模型组，氯 雷 他 定 组（２ｍｇ／ｋｇ），玉屏 风 散 组 （３ｇ／ｋｇ），苍耳 子 水 提 取 物 高 剂 量（４ｇ／ｋｇ，相 当 于 成人临床用量的６倍）、中剂量（２ｇ／ｋｇ）、低剂量（１ ｇ／ｋｇ）组，每组１０只，雌雄各半。

１．２ 药物与试剂

中药苍耳子于２０１７年１０月采 自北京市朝阳区长乡店，经安徽中医药大学方成武 教授鉴定为菊科植物苍耳 （Ｘａｎｔｈｉｕｍｓｉｂｉｒｉｃｕｍ Ｐａｔｒ．）成熟带总苞的果实。采用水提取法制备， 滤液加热浓缩至浓度为０．４ｇ／ｍＬ，备用；将氯雷他 定片溶于蒸馏水，制成２ｍｇ／ｍＬ 的溶液；将玉屏风 散溶于蒸馏水，制成３ｇ／ｍＬ的溶液。 卵蛋白（ｏｖａｌｂｕｍｉｎ，ＯＶＡ；批 号 ９２６Ａ０３４）：北京索莱宝科技有限公司；氢氧化铝（批 号 ２１６４５－５１－ ２）：上海麦克林生化科技有限公司；氯雷他定（批号 １８０２２５０７３）：西安 杨 森 制 药 有 限 公 司；玉 屏 风 颗 粒 （批 号 ＺＦＢ１７０４）：云 南白药集团股份有限公司； ＩｇＥ、ＩＬ－４、ＩＦＮ－γＥＬＩＳＡ 检测 试 剂 盒（批 号 分 别 为 ２０１８０５１６、２０１８０５２２、２０１８００４２６）：北京 安 迪 华 泰 科 技有限公司。

１．３ 仪器

ＭＳＳ全波长酶标仪（型号 ＲＴ－６０００）： 深 圳 雷 杜 公 司；高 速 冷 冻 离 心 机 （型 号 ＪＷ３０２１ＨＲ）：安徽嘉文仪器公司；涡旋混合器（型号 ＧＬ－８８Ｂ）：其林贝尔仪器制造公司；ＴＳ－１２生物组织 自动脱 水 机；ＢＭ－ＩＸ 生物 组 织 石 蜡 包 埋 机；ＬＥＩＣＡ ２０１６ 轮 转 式 切 片 机；ＯｌｙｍｐｕｓＢＸ５１ 显 微 镜；ＪＤ－ ８０ＩＤ形态学图形分析系统。

２ 方法

２．１ 模型复制

基础致敏阶段采用腹腔注射、局部 刺激 阶 段 采 用 滴 鼻 的 方 法 复 制 ＡＲ 豚鼠 模 型。 ①基础致敏阶段：ＯＶＡ 和氢氧化铝以１∶１００容积比 溶于生理盐水中，使 ＯＶＡ 的浓度为０．３％，作为致 敏剂。每只豚鼠腹腔注射１ｍＬ，隔日１次，共致敏 ７次，用时１４ｄ。②局部刺激阶段：从第２２—３１天， 对每只豚鼠采用滴鼻法，以５％ ＯＶＡ 生理盐水溶液 每侧５μＬ滴于豚鼠双侧鼻孔，隔日１次。以上步骤 正常组均以等容积生理盐水代替。 每日滴鼻后，依据鼻痒、流涕、呼吸轻重 程 度 及 喷嚏次 数 多 少 为 评 分 标 准。① 鼻 痒：轻 擦 鼻 几 次，计１分；挠 鼻 不 止，计２分；不 断 挠 鼻，计３分。 ②流涕：流至前孔，计１分；过鼻孔，计２分；流涕满 面，计３分。③呼吸：呼吸急促，计１分；明显喘息， 计２分；喘息致死，计３分。④喷嚏：滴鼻后３０ｍｉｎ 内１～３个，计１分；４～１０个，计２分；１０个以上，计 ３分。于第２２、２６、３０天滴 鼻 后３０ ｍｉｎ内，观察 各 组豚鼠的过敏性症状，并将各症状积分叠加，总分大 于５分者为模型复制成功。

２．２ 分组及给药

最后一次滴鼻后，根据鼻部行为 学症状评分结果重新随机分为７组。正常组与模型 组豚鼠灌胃给予等容量蒸馏水，其余各组豚鼠分别 灌胃给予相应药物，连续１４ｄ，每日１次。同时采用 ５％ ＯＶＡ 生理盐水溶液隔日滴鼻，以维持过敏性症 状直至实验结束。并于给药后第７、１３天滴鼻后３０ ｍｉｎ观察过敏性症状并进行评分。

２．３ 检测指标及方法

２．３．１ 鼻部行为学症状观察

模型复制期间，于局 部刺激阶段观察第２２、２６、３０天各组豚鼠的过敏性 症状并进行评分。给药期间，于给药第７、１３天再次激发，观察各组豚鼠的过敏性症状并记录最后一次 滴鼻评分。评分标准见“２．１项”。

２．３．２ 鼻黏 膜 组 织 病 理 变 化 观 察

末 次 给 药１ｈ 后，用１０％水合氯醛麻醉处死豚鼠，打开鼻盖骨，暴 露鼻甲及骨性 鼻 中 隔，剥 离 完 整 鼻 黏 膜 后 放 入４％ 甲醛固定，苏木精－伊红（ｈｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ－ｅｏｓｉｎ，ＨＥ）染 色，光学显微镜下观察、拍照、分析。

２．３．３ 血清ＩＬ－４、ＩＦＮ－γ及ＩｇＥ水平检测

末次给 药１ｈ后，用１０％水合氯醛麻醉处死。腹主动脉取 血，推入离心管静置３ｈ后，４ ℃ ３０００ｒ／ｍｉｎ离心 １０ｍｉｎ，收集血清。根据酶联免疫吸附试验试剂盒 说明书 操 作，依 次 检 测 实 验 豚 鼠 血 清 中ＩＬ－４、ＩＦＮ－ γ、ＩｇＥ水平。 ２．４ 统计学方法 采用 ＳＰＳＳ１７．０软件进行统计 学分析。连续型变量采用“均数±标准差（ｘ珚±ｓ）”进 行统计学描述。采用单因素方差分析（数据全呈正 态分布时）或 Ｋｒｕｓｋａｌ－ＷａｌｌｉｓＨ 检验（数 据 不 全 呈 正态分布时）比较各组数据。Ｐ＜０．０５为差异有统 计学意义。

３ 结果

模 型 复 制 期 间，从 第１次 滴 鼻 开 始，豚 鼠 ３０ｍｉｎ内均出 现 不 同 程 度 挠 鼻、喷 嚏 症 状，但 无 明 显流涕、呼吸急促等症状；从第３次滴鼻开始，复制 模型的豚鼠不仅出现挠鼻不止、喷嚏不断，还出现流 涕、呼吸急促等症状；随着滴鼻次数的增加，模型豚 鼠过敏性症状也越来越明显。结果说明采用 ＯＶＡ 和氢氧化铝腹腔注射并局部刺激的豚鼠 ＡＲ模型复 制成功。给药后，与模型组相比，除玉屏风散组 外，其 他 用药组 ＡＲ豚鼠鼻部行为学症状积分均有不同程度 的降低，但差 异 无 统 计 学 意 义（Ｐ＞０．０５）。结果 说 明苍耳子水提取物对 ＡＲ豚鼠的过敏性症状有一定 影响。

４ 讨论

苍耳子作为临床治疗鼻渊头痛的常用药，具有 抗炎、镇痛、抗过敏、调节免疫等多种药理作用。在 调节免疫功能方面，苍耳子水煎液中琥珀酸被认为 可能是苍耳子调节免疫功能的活性成分之一。 王龙妹等发现，苍耳子水煎液对细胞免疫作用明 显。张芩等发现，玉屏风散合苍耳子散可调节机 体免疫功能。



 

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