胶原蛋白提取手艺优化（其林贝尔TS-200使用）

1 材料与方法 

1.1 材料与试剂 

秘鲁鱿鱼皮 北京市北水嘉伦水产品市场有限责任 公司。 氢氧化钠、正丁醇、冰乙酸、氯化钠、四甲基乙 二胺、过硫酸铵、考马斯亮蓝R-250（均为分析纯） 国药集团化学试剂有限公司；30 g/100 mL聚丙烯酰 胺储备液、1.0 mol/L Tris-HCl（pH 6.8）、1.5 mol/L Tris-HCl（pH 8.8）、10 g/100 mL十二烷基硫酸钠 （sodium dodecyl sulfate，SDS）溶液、5×Tris-甘氨酸 电泳缓冲液（含0.125 mol/L Tris、1.25 mol/L甘氨酸、 0.5 g/100 mL SDS）、5×SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 （SDS-polyacrylamide gel electropheresis，SDS-PAGE） 蛋白上样缓冲液（含10 g/100 mL SDS、0.25 mol/L Tris-HCl（pH 6.8）、体积分数50%甘油、0.5 g/100 mL溴 酚蓝、5 g/100 mL β-巯基乙醇） 北京兰杰柯科技有限 公司；蛋白Marker（11～245 kDa） 北京索莱宝科技 有限公司。 

1.2 仪器与设备 

DZF-6050真空干燥箱 北京莱凯博仪器设备有 限公司；Milli-Q超纯水系统 默克密理博实验室设备 （上海）有限公司；Sorvall LYNX-6000离心机 美国 赛默飞世尔科技公司；UV-2800紫外-可见分光光度计 美国尤尼柯公司；DYCZ-24KS凝胶电泳槽 北京六一 生物科技有限公司；PowerPac Universal电泳仪电源、 Gel Doc XR＋凝胶成像仪（配Image Lab Software） 美国Bio-Rad公司；TS-200摇床 海门市其林贝尔仪器制造有限公司；XploRA Plus拉曼光谱仪 日本 Horiba公司；Q200差示扫描量热（differential scanning calorimetry，DSC）仪 美国TA公司。

1.3 方法

水分含量测定：参照GB 5009.3—2016《食品安全国 家标准 食品中水分的测定》；蛋白质含量测定：参照 GB 5009.5—2016《食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定；脂肪含量测定：参照GB 5009.6—2016《食品 安全国家标准 食品中脂肪的测定》；灰分含量测定： 参照GB 5009.4—2016《食品安全国家标准 食品中灰分 的测定》。参考Matmaroh等的方法，取适量秘鲁鱿鱼皮用超 纯水冲洗干净，在4 ℃条件下，以液料比20 mL/g加入 0.1 mol/L NaOH溶液浸泡20 h，以除去秘鲁鱿鱼皮中的非 胶原蛋白；然后用超纯水冲洗秘鲁鱿鱼皮至pH值中性， 沥干后，以液料比10 mL/g加入10 g/100 mL正丁醇溶液， 搅拌浸泡20 h，以除去秘鲁鱿鱼皮中的脂肪，然后用超纯 水冲洗鱿鱼皮至中性，沥干，备用。

2 结果与分析

秘鲁鱿鱼皮中含有大量水分，其次是蛋 白质，约占干物质的90%，这与魏薇薇等的阐述一致。 通过GB/T 9695.23—2008《肉与肉制品 羟脯氨酸含量测 定》测得秘鲁鱿鱼皮中羟脯氨酸的含量为1.17%，胶原蛋 白含量为12.99%，占蛋白质总量的70.75%，可见秘鲁鱿 鱼皮中胶原蛋白含量较高，是一种提取水产胶原蛋白的 优质原料。随着液料比的增加，ASC提取率逐渐 上升。液料比10～20 mL/g时，ASC提取率增加明显；液 料比高于20 mL/g时，ASC提取率增加缓慢，提取率为 25.40%～26.14%。因此，选择液料比为15、20、25 mL/g 进行响应面试验。

3 结 论 

以秘鲁鱿鱼加工副产物鱿鱼皮为原料，以ASC提取 率为指标，对冰醋酸浓度、液料比和浸泡时间进行单因 素试验和响应面试验优化，得到秘鲁鱿鱼皮ASC最佳提 取工艺。通过紫外全波长扫描、SDS-PAGE、拉曼光谱 及DSC测定提取的ASC特性，发现采用最佳工艺提取的 ASC属于典型的Ⅰ型胶原蛋白，含有α1、α2和β链，且 蛋白结构完整，三螺旋结构未被破坏，其热变性温度为 50.07 ℃。本研究可为制备水产胶原蛋白包装材料提供理 论依据，并为秘鲁鱿鱼皮进一步加工利用提供参考，进 而提高秘鲁鱿鱼副产物价值，减少资源浪费。

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