大鼠发病机制分析（其林贝尔振荡仪使用）

1 材料和方法 

1.1 实验动物 

健康雄性 Wistar 大鼠，体质量 180~220 g，由北京维通利华动物实验中心提供，动 物合格证编号：SCXK（京）2016-001。饲养于天津市南开医院实验动物中心。 

1.2 实验主要试剂与仪器 

末端脱氧核苷酸转移 酶介导的缺口末端标记测定（Tunel）试剂盒购自瑞 士 Roche 公司；Akt 抗体、p -Akt 抗 体、Bax 抗 体、 Bcl -2 抗 体 、Caspase -3 抗 体 均 购 自 Cell signal technology 公司；二喹啉甲酸（BCA）蛋白浓度测定试 剂盒（Thermo 公司）、涡旋振荡仪（其林贝尔仪器制造有限公司）、低温高速离心机（Eppendorf 公司）、电 泳仪（美国 GE 公司）、转膜仪（美国 GE 公司）。 

1.3 实验方法

大鼠实验期间保持 自由饮水和进食，饲养环境温度为（24±1）℃，湿度 为 55%±5%，实验前适应性喂养 1 周。根据随机数字表将 115 只大鼠分为空白组 （15 只）、假手术组 （20 只）、痰浊组（20 只）、血瘀组（30 只）、痰瘀互结 组（30 只）。空白组、假手术组和血瘀组用普通饲料 喂养 8 周。痰浊组和痰瘀互结组用高脂饲料喂养 8 周，第 49 天目内眦取血，剔除血脂未升高的大鼠。 第 54 天，血瘀组和痰瘀互结组行冠状动脉左前降 支结扎术，假手术组只穿线，不结扎。实验过程中剔 除不符合标准的大鼠，并记录死亡情况。8 周末大鼠腹腔注射 10% 水合氯醛麻醉，腹主动脉取血后生理盐水冲洗心 脏，剪取心脏，-80 ℃冰箱保存待测。

2 结果

空白组和假手术组未见明显细胞 凋亡，与假手术组相比，痰浊组、血瘀组和痰瘀互结 组大鼠心肌细胞凋亡数目增加，痰浊组大鼠心肌可 见少量细胞凋亡，血瘀组和痰瘀互结组大鼠心肌组 织存在大量细胞凋亡。与假手术组相比，空白组大鼠 Akt、Bcl-2、Bax 和 Caspase-3 蛋白表达水 平和 Bax/Bcl-2 比值无统计学差异，p-Akt 蛋白表达 水平明显升高（P＜0.01）；血瘀组和痰瘀互结组大鼠 Akt、p-Akt 和 Bcl-2 蛋白表达水平明显降低（P＜0.05 或 P＜0.01）；Bax 和 Caspase-3 蛋白表达水平明显升 高（P＜0.05 或 P＜0.01）。

3 讨论 

CHD 属中医“胸痹”范畴，《金匮要略·胸痹心痛 气短脉证治》中记载：“师曰：夫脉当取太过不及，阳 微阴弦，即胸痹而痛，所以然者，责其极虚也。”提出 胸痹的病机为“阳微阴弦”，中医证型多属本虚标 实，虚实夹杂的复合证型。《症因脉治》云：“胸痹之 因，饮食不节，饥饱损伤，痰凝血滞，中焦混浊，则闷 食闷痛之症作矣。”表明“痰浊”和“血瘀”为 CHD 重 要的致病因素。

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