其林贝尔设备对于细胞胆固醇代谢的研究

材料与方法

荧光倒置显微镜，日本 Nikon 株式会社 ( 型号: Ti-U) ; 离心机，德国 Hettich zentrifugen 公司( 型 号: Ｒotina 420) ; CO2 细胞培养箱，德国美墨尔特公司 ( 型号: INCO 108) ; 生物安全柜，芬兰 Kojair Tech Oy 公 司( 型号: BioWizard Sliver SL-130 Class Ⅱ) ; 水浴锅，德 国美墨尔特公司( 型号: WNB29L4 L612．0144) ; 水平 摇床，中国其林贝尔公司( 型号: TS-2) ; 梯度 PCＲ 仪， 日本 Astec 公司( 型号: G02) ; 实时荧光定量 PCＲ 仪，美 国 ABI 公司( 型号: 7500 Fast Ｒeal-Time PCＲ System) ; 电泳槽，美国 Bio-Ｒad 公司( 型号: Mini-PＲOTEAN Tetra System) ; 显影仪，美国 Bio-Ｒad 公司( 型号: Chemidoc) ， 半干转转膜仪，美国 Bio-Ｒad 公司( 型号: Trans-Blot SD Cell) 。将冻存的 HepG2 细胞放入 37 ℃ 水 中解冻，摇晃使其融化。用一次性移液器吸取多余培 养基至细胞瓶内( 剩余培养基为 5 mL 左右) ，将细胞瓶 放入显微镜下观察细胞状态，随后放入细胞培养箱。

结果

与空白对照组比较，各剂量 ox-LDL 诱导模型组 HepG2 细胞 miＲ-33a 基因表达量显著增加( P＜0．01) 。 与模型组比较，辛伐他汀组显著降低 20、40、160 mg /L ox-LDL 诱 导 HepG2 细 胞 后 miＲ-33a 的 表 达 水 平 ( P＜0．01) 。与 模 型 组 比 较，冠 心 康 显 著 下 调 各 组 HepG2 细胞 miＲ-33a 表达水平( P＜0．01) 。组间 方 差 分 析 可 见，用 20 mg /L ox-LDL 诱 导 HepG2 细胞 24 h 后，模型组细胞出现 miＲ-33a 过表达 ( P＜0．01) 。从 40 mg /L ox-LDL 诱导开始，模型组细胞 miＲ-33a 的表达受到抑制，但仍高于空白对照组，随着 浓度升高，该抑制效果逐渐减轻。microＲNA 是一种长度约为 18 ～ 24 个核苷酸且广 泛参与外周血循环的微小非编码单链 ＲNA。miＲ-33 被广泛认为是脂质调节的一个重要调控因子，有学者 发现抗 miＲ-33 寡核苷酸可以大幅增加 HDL 水平。 其机制可能是 miＲ-33 在体内通过胆固醇逆向转运来 调节血浆 HDL 水平。当细胞内的胆固醇低于基 线水平时，miＲ-33a 抑制 NPC1 表达，一方面促进内源 性胆固醇合成和胞外摄取，另一方面抑制 27-羟基胆甾 醇，减少胆固醇流出。

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