震荡器在大鼠炎性反应的调节中的使用

过敏性鼻炎（ａｌｌｅｒｇｉｃｒｈｉｎｉｔｉｓ，ＡＲ）是由 免 疫 球 蛋白 Ｅ（ＩｇＥ）介导的Ⅰ型变态反应，临床上以鼻痒、 打喷嚏、流清涕、鼻塞等为主要症状，严重影响了患 者的生活、学习和工作。ＡＲ 的发 病 机 制 尚 未 完 全清楚，目前普遍认为 ＡＲ 是一种由多种炎性细胞 和细胞因子共同参与的鼻黏膜炎性疾病。研究发现，转化生长因子具有致炎和抗炎的双重作用，在 正常环境下可促进组织修复，抑制炎性反应的发展， 而过 度 产 生 的 ＴＧＦ－β１ 则进 一 步 导 致 炎 性 反 应 加 重。

６周龄ＳＰＦ 级雄性 健 康 Ｗｉｓｔａｒ大鼠４０只，体 质量１５０～２００ｇ，由浙江中医药大学实验动物中心 提供，许可 证 号 ＳＣＸＫ（沪）２０１３－００１６。饲养 环 境： 分笼饲养，室温２１～２５ ℃，湿度６０％～７０％。常规 颗粒饲 料 喂 养，正 常 饮 水，１２ｈ昼夜 节 律。按 照 随 机数字表将大鼠随机分为正常对照组、模型组、药物 组、穴贴组，每组１０只。实验过程中对动物的处置 符合科技部颁布的《关于善待实验动物的指导性意 见》。

卵白蛋 白 （美 国 Ｓｉｇｍａ公 司），氢 氧 化 铝 粉 末 （上海阿拉丁生化科技有限公司），丙酸氟替卡松鼻 喷雾剂（英 国 ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ公司），大鼠ＩｇＥ 酶 联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）试剂盒（美国 Ｃｕｓａｂｉｏ公 司），大鼠 ＴＧＦ－β１ＥＬＩＳＡ 试剂盒（杭州联科生物技 术有限公司），生白芥子粉、延胡索粉、生甘遂粉、细 辛粉（均购自浙江省中医院中药房）。酶标 仪 ＭＫ３ （美国 ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ公司），ＱＢ８００２ 震 荡器（海门市其林贝尔仪器制造有限公司），４０２Ｂ超 声雾化机（江苏鱼跃医疗设备股份有限公司），低温离心机（德 国 Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ公司），石蜡 切 片 机（德 国 Ｌｅｉｃａ公司），光学显微镜（ｅｃｌｉｐｓｅ８０，Ｎｉｋｏｎ公司）， 格林蓝 德（ｍａｒｏｌａｎｄｉＥＩＳ－ＧＭ ｖ５．５．４３０４８）病理 信 息管理软件。

对模型组、药物组、穴贴组采用卵白蛋白注射及 鼻黏膜刺激法建立 ＡＲ大鼠模型：以卵白蛋白１０ｍｇ、 氢氧化铝粉末１０ｍｇ及０．９％氯化钠溶液１ｍＬ混 合后腹腔注射，隔日１次，连续７次，作为基础致敏。 第１５天起进行加强免疫，给予５％卵白蛋白５０!Ｌ滴 鼻／侧和ｌ％卵白蛋白喷雾吸入１０ｍｉｎ（３ｍＬ／ｍｉｎ）， 每日１次，连续９ｄ。正常对照组予等量０．９％氯化 钠溶液腹腔注射、滴鼻和雾化，方法同模型组。

穴贴组：将生白芥子粉、延胡索粉、生甘遂粉、细 辛粉按１∶１∶０．５∶０．５的比例混匀后用生姜汁调和 成糊状，做成药饼（长×宽×高＝０．７ｃｍ×０．７ｃｍ× ０．３ｃｍ），置４ ℃冰箱 中 备 用。选 取 大 鼠 背 部 双 侧 “肺俞”“脾俞”“肾俞”穴，穴 位 定 位 参 考《实 验 针 灸 学》。穴区脱毛备皮，０．９％氯化钠溶液清洁局部， 在本研究开始的第２４、２６、２８、３０、３２、３４、３６天，将制 作好的药饼用医用胶布固定于上述穴区，每次贴敷 ２ｈ，２ｈ后揭去胶布和药饼，０．９％氯化钠溶液清洁 穴区局部，共贴敷７次。 药物组：借助微量移液器予丙酸氟替卡松滴鼻 （５ !Ｌ／侧，依据成人用量通过千克体质量剂量折算 系数法换算），每日１次，连续１４ｄ。 正常对照组：借助微量移液器予等量０．９％氯化 钠溶液滴鼻（５!Ｌ／侧），每日１次，连续１４ｄ。

分别于治疗前（第２３天）和治疗后（第３７天）将 每只大鼠置于透明箱中３０ｍｉｎ，分别对所有大鼠鼻 痒、喷嚏、流涕等行为学指标进行评分。鼻痒：搔鼻 １～５次为１分，６～１０次为２分，多于１１次为３分； 喷嚏：１～３个 为 １ 分，４～６ 个 为 ２ 分，６ 个 以 上 为 ３分；流 涕：溢 至 鼻 孔 为 １ 分，明 显 流 滴 出 鼻 孔 为 ２分，涕流满面及挂满须毛为３分。将３个 指 标 的 分数相加即为总行为学评分。 ＥＬＩＳＡ法检测各组大鼠血清中ＩｇＥ、ＴＧＦ－β１含 量：评分后大鼠心脏取血４～５ｍＬ，３０００ｒ／ｍｉｎ、４℃离 心１５ｍｉｎ，取上清液，置于－８０ ℃冰箱 中 保 存 待 测。 根据 ＥＬＩＳＡ 试剂盒的步骤进行操作，酶标仪检测结 果得到样品的吸光度值，利用标准曲线方程计算出 ＩｇＥ、ＴＧＦ－β１的含量。 苏木素伊红（ＨＥ）染色法观察大鼠鼻黏膜 ＥＯＳ浸润情况：采 血 后，１０％水合 氯 醛３００ ｍｇ／ｋｇ腹腔 注射麻醉大鼠，心脏放血处死。剥除上颌骨皮肤，取 大鼠鼻中隔黏膜放入１０％甲醛溶液中固定，依次乙 醇梯度脱水、二甲苯透明、浸蜡、包埋，４ ℃保存。切 片，厚度为５ !ｍ，ＨＥ 常规染色，每组大鼠选择２张 切片，每张光学显微镜下随机选取１０个高倍视野观 察 ＥＯＳ浸润情况。‘

治疗前，与正常对照组比较，模型组、药物组和穴 贴组大鼠行为学评分明显升高（Ｐ＜０．０５），提示造模 成功。治疗后，与正常对照组比较，模型组大鼠行为 学评分明显升高（Ｐ＜０．０５）；与模型组比较，药物组和 穴贴组大鼠行为学评分明显下降（Ｐ＜０．０５）；药物组 与穴贴组之间差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。见图１。

３ 讨论

ＡＲ以鼻黏膜 炎 性 反 应 为 特 征，若 不 及 时 控 制 则长期的炎性刺激可导致鼻黏膜上皮细胞损伤及杯 状细胞化生、细胞外基质沉积，最终导致鼻黏膜组织 重塑并发生不可逆转的改变。ＡＲ 症状是炎性反 应的具体表现，在本研究中，穴贴组的行为学评分较 模型组明显下降，且穴贴组、药物组之间差异无统计 学意义，表明穴位贴敷可以有效控制炎性反应，从而 改善 ＡＲ症状，其治疗效果和丙酸氟替卡松相当。 ＡＲ为ＩｇＥ介导的Ⅰ型变态反应，ＩｇＥ为亲细胞 抗体，通过其Ｆｃ段与肥大细胞或嗜碱性粒细胞表面 的高亲和力ＩｇＥＦｃ受体结合，导致两者的活化和脱 颗粒，进一步释放出炎性介质，使鼻黏膜充血水肿、 分泌物增加，病理上以大量 ＥＯＳ等炎性细胞浸润为 特征，其数量可反映鼻黏膜局部的炎性反应程度。 减少 ＥＯＳ在鼻黏膜局部的募集和浸润，是减轻鼻黏 膜炎性损伤的重要途径。本研究 中，穴 贴 组 ＡＲ 大鼠血清ＩｇＥ含量较模型组明显下降，鼻黏膜无明 显 ＥＯＳ浸润，说明 穴 位 贴 敷 可 以 有 效 减 少 ＥＯＳ浸 润，减轻机体的炎性反应程度。