涡旋混合器对小鼠宿醉头痛指标的分析

中国酒文化源远流长，酒在当今社会的各种交际活 动、社交场合更是不可或缺。但近年来研究显示，国内外急 性酒精中毒发病率均呈上升趋势，考虑其庞大群体，并且 容易成为多种急症的诱发因素，故应予以重视。急性酒精 中毒是指在短时间内摄入大量酒精或含酒精饮料后出现 的中枢神经系统功能紊乱状态，严重程度与饮酒速度、饮 酒量、血液酒精浓度及个体耐受性等有关，通常伴有头痛、 头晕和胃部不适等延续效应。

同品牌不同勾调工艺的48°浓香型白酒（编号分别为 ①号、②号），主要理化成分见表1，由四川省绵阳市丰谷酒 业有限公司提供。

Balb/c小鼠（雄性，日龄（42～48 d），SPF级）：北京维通 利华实验动物有限技术公司（生产许可证号：SCXK（京） 2016-0011）。独立通气笼盒（individually ventilated cages， IVC）室饲养，环境温度20～22 ℃，相对湿度60%～70%，由 四川大学华西公共卫生学院实验动物中心提供（使用许可 证号：SYXK（川）2018-011）。

7890B气相色谱仪、7697A顶空进样器：美国Agilent公 司；ECTM-WAX毛细管色谱柱（30 m× 0.53 mm×1.2 μm）：美 国Alltech公司；HeraeusTM FrescoTM 21微量离心机、Multiskan Go全波长酶标仪：美国Thermo Scientific公司；749540-0000 手持式匀浆器：美国Kimble公司；γ放射免疫计数器：安徽 中科中佳科学仪器有限公司；手动连续分液器：美国Gilson 公司；TS-1脱色摇床、XW-80A涡旋混合器：海门市其林贝尔仪器制造有限公司；隔水式电热恒温培养箱：上海跃进医疗器械厂；V型槽：自制。‘

160只Balb/c小鼠适应性饲养后，按体质量进行分层随 机分组，分为样①组、样②组、酒精对照组和空白对照组， 剂量设置见表2。

1.3.2 翻正反射实验

禁食不禁水12 h，不同组别小鼠称体质量后，分别按相 应剂量进行灌胃。参考CRABBE J C等方法，将小鼠背部 置于V型槽中呈仰位，30 s内未能翻转身体，即翻正反射 消失，记录醉酒时间（min）；60 s内能连续2次翻转身体，即 翻正反射恢复，记为醒酒时间（min）；并计算醉酒率（%）。

当小鼠翻正反射恢复时，立即抓取固定使其眼球突出 充血，用弯头眼科镊迅速钳取眼球，使血液流入抗凝离心 管中，颠倒混匀后4 ℃、3 000 r/min离心15 min，取上清， -20 ℃冰箱保存备测。不同的抗凝剂适用于不同的指标测 定，加入100 μL肝素钠溶液的抗凝管用于乙醇、PGE2、HIS 含量测定；加入100 μL 1% EDTA、100 μL抑肽酶的抗凝管 用于ET、SP、MEK、CGRP含量测定。

血浆乙醇浓度测定：标本平衡至室温后，取200 μL待 测标本加入顶空玻璃中，再加入2 mL超纯水，盖紧瓶盖后 放于顶空进样装置中进行汽化平衡，自动进样1 mL，气相 色谱法检测。色谱条件：ECTM-WAX毛细管色谱柱（30 m× 0.53 mm×1.2 μm）；分流进样，分流比10∶1；载气：N（纯度 2 99.999%），流速25 cm/s；氢火焰离子化检测器：250 ℃；进 样口温度：200 ℃；程序升温：40 ℃保留5 min，以20 ℃/min 升至200 ℃，保留7 min；顶空气化条件：平衡时间30 min，加 热温度70 ℃，传输线温度90 ℃，进样针温度70 ℃。

急性酒精中毒是指一次性过量饮酒所致的急性中毒， 常伴有头痛、头晕和胃部不适等延续效应。研究表明，当 乙醇暴露剂量超过3.5 g/kg，绝大多数小鼠均会出现翻正反 射消失的现象，故根据前期预实验，本研究采用11 mL/kg 体质量（约4.2 g/kg）的单次灌胃剂量进行急性酒精中毒 模型建立。饮酒后，乙醇主要在胃肠道被吸收，约90%～98%的 乙醇通过肝脏进行代谢，代谢速率与摄入量、酶活性等相 关。饮酒后，乙醇主要在胃肠道被吸收，约90%～98%的 乙醇通过肝脏进行代谢，代谢速率与摄入量、酶活性等相 关。CGRP是血管周围神经释放的最主要的血管活性肽类 物质，是迄今已知最强的血管舒张肽，在偏头痛的发病机 制中起着关键性作用。

综上所述，不同浓香型白酒对小鼠宿醉头痛相关效应 指标的影响存在差异，其中酒样①较酒样②能诱导产生更 高的SP、MEK含量水平，结合白酒理化成分分析，提示可 能与酒样中较高的总酸、乙醛、乙缩醛等微量成分有关。