漩涡混悬器使用于细胞因子表达的影响的分析

支气管哮喘是一种气道慢性炎症性疾病，Th2 细 胞在诱导和维持免疫炎症过程中起重要的作用。 Th2 细胞 主 要 分 泌 白 细 胞 介 素-8 （IL-8）、肿 瘤 坏 死 因 子-α（TNF -α）等 促 进 IgE 的 合 成 、嗜 酸 性 粒 细 胞 （EOS）的生 长 与 分 化，以 及 黏 液 分 泌 、气 道 高 反 应 （AHR）的发生。 气道平滑肌细胞（ASMCs）具有收缩功 能及分泌功能，能分泌趋化因子、细胞因子等多种炎 性介质，对气道炎症的发生及发展起着重要的作用。研 究表明，与哮喘发生有关的 Th2 型细胞因子 IL-8 及趋化因子 TNF-α 等在 ASMCs 上均有表达，它们在参与气道炎症的发生、EOS 的生长与分化以及 AHR 的发生过程中均起重要作用。

阿奇霉素注射液（苏州长征-欣凯制药有限公司， 生产批号：121128）；地塞米松磷酸钠注射液（辰欣药 业股份有限公司，生产批号：1210206432）；鸡卵白蛋 白（OVA）（Ⅱ、Ⅴ级）（上海研生生化试剂有限公司）； DAB 显色试剂盒[生工生物工程（上海）有限分公司]； 多聚赖氨酸（北京格瑞纳健峰生物技术有限公司）；大 鼠 IL -8、TNF -α 酶 联 免 疫 吸 附 测 定 （ELISA） 试 剂 盒（美 国 R&D 公司）；402Ai 超声 雾 化 器（上 海 鱼 跃 医 疗 设 备 有 限 公 司）；FA1004 型微量电子天平 （精 度：0.1 mg， 上海赛德利思精密仪器仪表有限公司）； QL-902 漩涡混悬器 （海门市其林贝尔仪器制造有限 公司）；AXTGL16M 高速低温离心机 （上海赵迪实验室仪器设备有限公司）；普通光学显微镜（ 苏州耀宏光电科技有限公司 ） ；Qwin550w 型计算机病理图 像分析系统（德国 LeicaQwin公司）。

6～8 周龄 的 BALB/c 小鼠 共 32 只 ，雌性 ，体 重 20～25 g，购自潍坊医学院（以下简称“我校”）实验动 物中心。清洁喂养，环境温度控制在 22～25℃，环境湿度 控制在 40%～70%，进水不限，喂养食物中不含 OVA。本研究经我校动物试验伦理委员会审核并予以批准。

32 只小鼠采用随机数字表法分为四组：A 组，生 理盐水对照组；B 组，哮喘组；C 组，阿奇霉素干预组； D 组，地塞米松干预组。每组 8 只小鼠。清洁级复制哮 喘模型：分别于第 0、7、14 天，予 B、C、D 组小鼠腹 腔注 射 OVA 25 μg+Al（OH）3 1 mg。 致敏 1 周后 第 21～26 天， 将小鼠置于透明玻璃容器中，2% OVA 生 理盐水溶液雾化吸入。A 组予等量生理盐水代替 OVA 致敏和激发。各组小鼠均每天激发 1 次，30 min/次，激 发 6 d。 B 组激发后未予任何药物干预。 C 组于第 14天 起，雾化吸入 1 h 后皮下注射阿奇霉素 0.4 mg/mL，连 续 7 d。 D 组于第 14 天起，雾化吸入 1 h 后皮下注射 地塞米松磷酸钠 2 mg/kg，连续 7 d。

激发后 24 h （第 27 天），处 死 小 鼠，打 开 小 鼠 胸 腔 取 右 肺 组 织， 10%中性甲醛固定，脱水、包埋，制作蜡块，病理切片， 进行苏木精-伊红（HE）染色，100×光镜下观察肺组织 结构。

激发 后 24 h（第 27 天），各组小鼠 用 37℃生理盐 水 1 mL 进行肺灌洗，反复 3 次，收集左肺支气管肺泡灌洗液 （BALF），采用 ELISA 法检测 IL-8、TNF-α、嗜酸性粒 细胞计数及白细胞计数。 试验步骤严格按照试剂盒说 明书进行。

采用 SPSS 13.0 统计软件对数据进行分析，计量 资料以均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因 素方差分析，两两比较采用 LSD-t 检验，以 P ＜ 0.05 为差异有统计学意义。

B 组小 鼠 于 雾 化 激 发 时 出 现 烦 躁 不 安、抓 耳 挠 腮、呼吸急促、打喷嚏、流涎、大小便失禁、腹肌强直等 哮喘反应；而 C 组及 D 组雾化激发时上述反应均减轻； A 组几乎无任何反应。

A 组小鼠气道黏膜无增厚，气道周围无炎症细胞 浸润，肺泡壁结构完整；B 组小鼠气道黏膜充血水肿， 气道周围较多炎症细胞浸润，肺泡结构被破坏；C 组 小鼠气道周围少量炎症细胞浸润，管壁无明显增厚； D 组小鼠程度与 C 组小鼠相似。 见图 1（封四）。2.3 各组小鼠 BALF 中白细胞总数和 EOS 百分比的 比较 与 A 组比 较，B 组小 鼠 BALF 中白 细 胞 总 数 和 EOS 百分比均显著升高，差异有高度统计学意义（P ＜ 0.01）。 与 B 组比较，C 组和 D 组小鼠 BALF 中白细胞 总数及 EOS 百分比明显降低，差异有高度统计学意 义（P ＜ 0.01）。C、D 两组白细胞总数和 EOS 百分比比较， 差异无统计学意义（P ＞ 0.05）。 见表 1。

3 讨论

既往研究发现，在慢性哮喘患者和动物模型中均 存在气道上皮脱落、气管周围炎症细胞浸润、AHR 等 改变。 炎性细胞因子（如 IL-8、TNF-α﹚是目前用于 判断气道炎症的主要指标。 气道炎症被认为是哮喘的 本质，T 细胞在控制气道炎性反应中起重要作用，Th1/ Th2 细胞比例失衡，Th2 型细胞因子分泌增多在气道 炎症的形成中发挥重要作用。 本研究发现：哮喘 组小鼠支气管肺泡灌洗液中 IL-8 和 TNF-α 浓度均 较正常对照组明显降低。 与既往研究结果相符。综上所述，本研究发现阿奇霉素可以抑制 IL-8、 TNF-α 的表达，阻碍 Th2 型细胞因子的生成，缓解气 道炎症。