微量振荡器使用于芦荟凝胶的晒后修复功效分析

芦荟是一种多年生百合科芦荟属肉质的草本 植物，最早起源于南非，作为天然药用植物，芦荟 已有几千年的药用历史，在我国古代医书《神农本 草经》、《本草纲目》、《本草拾遗》中均记载着芦荟 特殊的药用功效，在《辞海》中也有相关记载： “芦荟，主产于热带非洲，中国云南元江有野生”。 在日本，人们把芦荟称之为“不需要大夫”（医者いらず），被誉为世界标准药典的《英国药典》对 其也有入药记载 。

库拉索芦荟凝胶冻干粉（批号 20170829，云南万绿生物股份有限公司）、甘草酸二钾、透明质 酸钠（Bomei，相对分子质量在 0.8 × 106 ~ 2.0 × 106 ）、透明质酸酶（上海源叶生物科技有限公司， 300 ~ 500 U/mg）、醋酸钠（NaC2H3O3•3H2O）、角质 形成细胞培养液（第四军医大学组织工程中心）、 PBS（博士德）、MTT（Sigma）、 DMSO（Sigma）、 Human IL - 1α ELISA KIT（博士德）、Human IL - 8 ELISA KIT（Abcam）。冰醋酸、氯化钠、十六烷基 三甲基溴化铵（CTAB），均为国产分析纯。

紫外 - 可见分光光度计（Thermo）、CO2 培养 箱（Thermo）、超净工作台（苏净安泰）、倒置显微 镜（Olympus）、微量振荡器（其林贝尔）、酶标仪 （BioTek）、恒温箱（泰斯特）。

1.1.3 测试系统
 

细胞实验所用细胞为角质形成细胞，由广东 博溪生物科技有限公司通过细胞原代、传代培养获得。

透明质酸酶能将大分子的透明质酸水解成低 分子化合物，未水解的透明质酸会与十六烷基三甲 基溴化铵（CTAB）形成不溶物，而水解后的低分子 化合物不会。通过测定 405 nm 处的浊度值，可以 反映透明质酸酶的活性。 实验设置：将库拉索芦荟凝胶粉按照 16.5、 33、82.5 和 165 mg/mL 的质量浓度进行分组，每 个实验分组按表 1 进行操作。

1.2.2 基于角质形成细胞的 MTT 检测实验

实验方案：库拉索芦荟凝胶粉样品检测设置 8 个浓度梯度，每个浓度梯度下设置 3 个重复孔，同 时，实验设置溶剂对照孔、调零孔（角质形成细胞 培养液）和阳性对照孔（PC， 40 mg/mL DMSO）。 通过 MTT 细胞活性检测方法，筛选下一步实验中 细胞给药的最大安全浓度。

数据经过 SPSS 12.0 统计软件做多组间单因 素方差分析，以 P<0.05 为差异有统计学意义，由 于测试平台特性，数据存在波动性，SD 值控制在 10% 以内。通过测试，库拉索芦荟凝胶粉在 16.5 ~ 165 mg/mL 范围内对透明质酸酶抑制率分别为 13.10% ~ 82.14%（P<0.05），低浓度下比对照品甘 草酸二钾效果稍弱，但在 165 mg/mL 的高浓度下， 可以达到与 0.5 mg/mL 甘草酸二钾接近的效果，本 次测试的结果表明，库拉索芦荟凝胶粉测试样具有 较好的透明质酸酶活性抑制作用，且在一定浓度范 围内，抑制率与添加量呈正相关，与 0.5 mg/mL 甘 草酸二钾的抑制趋势和效果接近。根据 MTT 实验结果可以看出：与溶剂对照相 比，当芦荟凝胶粉浓度为 250 mg/L 时，细胞的相 对活力值为 91.40%，且无细胞毒性（注：选取细胞 相对活力值大于 90% 的转折点浓度作为最大安全 给药浓度）。根据形态学结果可以看出：样品库拉索芦荟凝 胶粉质量浓度为 250 mg/L 时，细胞边缘轮廓清晰， 形态规则，胞内无明显颗粒物，与溶剂对照组细胞 状态无明显差异。故根据 MTT 结果和形态学结 果，最终确定样品库拉索芦荟凝胶粉在角质形成细 胞上的最大安全给药浓度为 250 mg/L。

芦荟作为一种具有漫长种植史的草本植物，在 很多地方被当地人用于保湿和修复方面的药材，而 对于芦荟含有的成分修复作用的研究也很多， 但大多是基于芦荟大黄素等蒽醌类物质的功效研 究，对芦荟凝胶的修复功效研究还较少。 透明质酸酶是一类在动物组织和微生物中广 泛存在的酶，它通过断开透明质酸（HA）糖链中的 N - 乙酰氨基葡糖和 D - 葡糖醛酸之间的糖苷键， 将其解聚和水解成小分子的 HA 或寡糖，HA 的代 谢对于皮肤的保湿、微观炎症和损伤的修复都有着 重要的作用，透明质酸酶调节 HA 代谢的作用在生 理活动中也越来越受到重视，活性成分对透明 质酸酶的抑制，与其保湿、晒后修复等功效都有着 重要的关联。 紫外线损伤，又称光老化，是由于皮肤在紫外线，特别是 UVB 的照射下，局部出现的红斑、角质 层破坏等微观损伤，也是皮肤众多微观炎症和损伤 中较为常见的微观损伤。