转移脱色摇床在药物性肝损伤大鼠信号通路的影

临床上，对乙酰氨基酚（APAP）是应用广泛的 解热镇痛药，但其大剂量服用或联合使用则会诱发药 物性肝损伤，严重者可导致肝衰竭甚至死亡。据美国 食品药品监督管理局统计，过量服用含 APAP 的药品 是导致患者肝衰竭最主要的因素。JNK2 为 c-Jun 氨 基末端激酶（JNK）的亚型之一，几乎在所有的细胞 中均有表达。研究表明，JNK2 基因敲除对肿瘤坏死 因子（TNF）介导的肝细胞损伤具有保护作用，从而 推测 JNK2 在 APAP 诱导的肝损伤中发挥重要作用。中医学根据药物性肝损伤的临床特点，将其 归属于“黄疸”“积聚”等范畴，而肝失疏泄、气滞 血瘀、脾失健运、湿浊内生为其主要的发病机制，疏 肝健脾、活血祛瘀、解毒除湿为其有效治法。

清洁级Wistar大鼠70只，雌雄各半，体质量180～ 220 g，北京维通利华生物技术有限公司提供，动物质 量合格证号 11400700181914，动物生产许可证号 SCXK（京）2012-0001。饲养于河北省中药配方颗粒 工程技术研究中心动物室（万级洁净屏障系统），温 度（23±2）℃，相对湿度 60%～70%，12 h 明暗交 替，自由摄食饮水。

解毒护肝方（柴胡 10 g，醋香附 15 g，白术 10 g， 炒白芍 15 g，五味子 10 g，黄芪 15 g，茵陈 15 g，黄 芩 10 g，丹参 15 g，楮实子 10 g，田基黄 15 g，甘草 10 g），饮片均为免煎颗粒，四川新绿色药业科技发展 有限公司。水飞蓟宾胶囊（每粒含水飞蓟宾 35 mg， 批号 750709172），天津天士力圣特制药有限公司；对 乙酰氨基酚片（每片含 APAP 0.5 g，批号 016171002）， 石药集团欧意药业有限公司

AST 测定试剂盒（批号 AUZ3645）、ALT 测定试 剂盒（批号 AUZ3689），贝克曼库尔特实验系统有限 公司；总胆红素（TBIL）试剂盒（批号 A005）、直接 胆红素（DBIL）试剂盒（批号 A006），长春汇力生物 技术有限公司；TNF-α（批号 T15030357）、白细胞介 素-6（IL-6，批号 S01030358），武汉华美生物工程有 限公司；Trizol（批号 139603），Invitrogen 公司； TIANScript cDNA 第一链合成试剂盒（批号 P5011）、 SuperReal PreMix Plus（SYBR Green，批号 Q5922）， 天根生化科技（北京）有限公司；JNK2 兔多抗、p-JNK2 （Tyr185）兔单抗，Cell Signaling Technology 公司； β-actin 小鼠单抗、辣根酶标记山羊抗兔 IgG（H+L）、 Peroxidase-Conjugated Goat anti-Rabbit IgG（H+L）、 辣根酶标记山羊抗小鼠 IgG （ H+L ）、 Peroxidase-Conjugated Goat anti-Mouse IgG（H+L）、 TLR3 兔多抗（批号 00009333）、二抗（Goat，批号 K186817A），DAB（批号 K186916P），北京中杉金桥 生物技术有限公司。Humalyzer2000 半自动生化仪（德 国豪迈），DP73 数码显微镜（日本 Olympus）， HMIAS-2000 显微图像分析系统（武汉同济医科大 学），酶标仪（BioTek，ELx800），荧光定量 PCR 仪 ABI7500（Applied Biosystems），电泳仪（北京百晶生 物技术有限公司），生物分光光度计（Eppendorf），电 泳槽（美国 BioRad），转移脱色摇床（海门其林贝尔仪器制造公司），Tanon Gis 电泳图像分析系统 （Tanon1600），Quantity one 分析软件（Bio Rad Technical Service Department）。

大鼠每日灌胃 APAP 1200 mg/kg 药液（40 ℃生 理盐水配制）1 次，连续 30 d，制作大鼠肝损伤模 型。将成模大鼠按体质量随机分为模型组、阳性 对照组和解毒护肝方高、中、低剂量组，每组 12 只， 另取 10 只大鼠为正常组，雌雄各半。解毒护肝方高、 中、低剂量组分别给予 63、31.5、15.75 g 原药材/kg 药液灌胃，阳性对照组给予水飞蓟宾（44 mg/kg）药 液灌胃，正常组和模型组给予等体积生理盐水灌胃。 给药体积均为 1 mL/100 g，每日 1 次，连续 30 d。实验期间每 7 d 称重 1 次，自由摄食饮水。

正常组大鼠毛发滑顺、有光泽，精神状态良好， 行动灵活，二便正常；模型组大鼠体质量减轻，毛发 无光泽，精神状态欠佳，喜卧；各给药组大鼠毛发光 泽度、精神状态、体质量及行动灵活性均有改善。

与正常组比较，模型组大鼠 ALT、AST、DBIL 水平显著升高，差异有统计学意义（P＜0.01）；与模 型组比较，阳性对照组和解毒护肝方中、低剂量组大 鼠 ALT、AST 活性显著降低，差异有统计学意义（P＜ 0.05，P＜0.01），解毒护肝方低剂量组大鼠 DBIL 含 量显著降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；与解毒 护肝方高剂量组比较，解毒护肝方中剂量组大鼠 ALT、AST 活性显著降低，差异有统计学意义（P＜ 0.05，P＜0.01）。

正常组大鼠肝细胞排列整齐，围绕中央静脉放射 状排列，细胞核形态正常，胞浆均匀，无变性及坏死； 模型组大鼠肝细胞排列紊乱，细胞呈现广泛水肿变性，散在少量点状坏死；解毒护肝方高、中、低剂量 组较模型组大鼠细胞结构紊乱有不同程度的改善，局部细胞水肿变性，未观察到点状坏死，以中、低剂量 组改善尤为明显。

临床上常用 ALT 和 AST 作为反映肝细胞损伤程 度的生化指标。正常情况下，二者在血清中含量很低， 但当肝细胞受到损伤时，细胞发生变性及坏死，细胞 膜通透性增加或发生崩解，ALT、AST 释放入血，血 中 ALT、AST 活性升高。 DBIL 能溶于水，可通过肾脏随尿液排出体外。 在发生广泛的肝损伤或直接抑制胆汁转运蛋白时会 使 TBIL 含量升高。当发生红细胞破坏过多或肝细胞 对胆红素出现转运、结合、排泄缺陷以及胆管阻塞时， 亦可导致胆红素代谢障碍。实验结果显示，模型组大 鼠肝组织 ALT、AST、DBIL 水平显著升高，提示肝 损伤模型建立成功；与模型组比较，阳性对照组和解 毒护肝方中、低剂量组均能显著降低大鼠肝组织 ALT、AST 活性，解毒护肝方低剂量组又能显著降低 大鼠肝组织 DBIL 含量；各给药组均能不同程度降低 大鼠肝组织 TBIL 含量，但各组间差异无统计学意义 （P＞0.05）。提示各给药组对损伤的肝细胞均有不同 程度的改善作用，尤以解毒护肝方中、低剂量组效果为佳。



 

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