黄原胶基因工程菌发酵条件优化（其林贝尔QL-9

1 材料与方法 

1． 1 材料 

1． 1． 1 菌株和试剂

黄原胶高产菌株 XccYH1 由本实验室 通过基因工程方法获得。抗生素利福平购自 Sigma 公司。 

1． 1． 2 仪器

PB － 10 pH 计( SAＲTOＲIUS AG) ; MP2002 电 子天平( 上海恒平科学仪器有限公司) ; DHP － 9052 型电热恒 温培养箱( 上海一恒科学仪器有限公司) ; SW － CJ － 2FD 洁 净工作台( 苏州安泰空气技术有限公司) ; ZHWY200B 恒温培 养振荡器( 上海智城分析仪器制造有限公司) ; LS － B50L －Ⅱ 立式压力蒸汽灭菌锅( 江阴滨江医疗设备有限公司) ; QL － 902 漩涡混合仪( 海门市其林贝尔仪器制造有限公司) ; DHG － 9240 鼓风干燥箱( 上海一恒科学仪器有限公司) 。 

1． 2 方法 

1． 2． 1 野油菜黄单胞菌胞外多糖的检测

将菌株 XccYH1 接种于 NYG 液体培养基( 5 g /L 蛋白胨，3 g /L 酵母粉， 20 g /L甘油) 中，30 ℃ ( 200 r/min) 摇床培养 24 h 后，调整菌 体浓度至 OD600约为 1． 0，并按 1% 的比例接种至含 4% 碳源 的 NYG 中( 含相应抗生素) ，30 ℃ ( 200 r/min) 摇床培养 5 d 后，加入 4 倍体积的无水乙醇沉淀胞外多糖，边注入边搅拌， 然后将絮状沉淀物取出后置于 42 ℃ 充分干燥，所得即为黄 原胶。以黄原胶重量作为衡量发酵效果的标准。 

1． 2． 2 碳源对黄原胶发酵的影响

以淀粉、葡萄糖、麦芽糖 和蔗糖作为培养基碳源，考察碳源对黄原胶发酵的影响。在 NYG 中加入 4% 淀粉、4% 葡萄糖、4% 麦芽糖和 4% 蔗糖作 为培养基，按照“1． 2． 1”方法进行黄原胶发酵，每组发酵设计平行做 3 个。

2 结果与分析

为进一步提高基因工 程菌 XccYH1 的黄原胶产量，首先探索不同碳源对黄原胶产 量的影响。以淀粉、葡萄糖和麦芽糖为碳源时， 黄原胶产量无显著性差异，而以蔗糖为碳源时，所产的黄原 胶产量最高，后续试验中以蔗糖作为碳源测定黄原胶产量。在低浓度碳源( 2% ～ 6% ) 时，黄原胶产量随着浓度的增 加而显著增加，当添加 6% 蔗糖时黄原胶 产 量 最 高，达 20． 3 g /L。但继续提高碳源浓度到 8% ，显著抑制菌体生长，也没有检测到黄原胶。因此，碳源浓度为 6% 时，黄原胶产量 最高。基因工程菌的 稳定性往往是能否进入工业化应用的重要评价指标，在非抗 生素压力条件下稳定性好的菌种将具有更好的应用前景，该 研究将 XccYH1 菌株在无抗性的培养基上连续划线传 10 代 后，菌落形态没有差异，进一步考察了传不同代数时黄原胶 的产量。

3 结论与讨论 

野油菜黄单胞菌( Xcc) 是十字花科植物黑腐病菌的病原 菌，在全球范围内引起植物病害，造成重大的经济损失。Xcc 在植物侵染过程中产生众多的致病因子，包括蛋白酶、纤维 素酶、胞外多糖等，因此 Xcc 也是研究细菌与植物互作的模式菌种。另一方面，Xcc 产生的胞外多糖( 黄原胶) 又具有 重要的工业价值，在食品、药品、化妆品等诸多领域中有广泛 的应用。

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