急性髓系白血病分析（其林贝尔LX-400使用）

材料和方法 

病例的一般资料 收集 2016 年 8 月-2018 年 8 月蚌埠医学院第一附 属医院血液内科经细胞学、免疫学、细胞遗传学、 分子生物学（MICM）确诊的初发急性髓系白血病 患者 108 例，其中男 61 例，女 47 例；中位年龄 55（13-79）岁。依据 FAB 分型标准：除去 1 例急 性混合细胞白血病，其余 AML-M1 8 例，AML-M2 45 例，AML-M3 10 例，AML-M4 18 例，AML-M5 25 例， M6 1 例。

试剂与仪器 

DNA 提取试剂盒为上海源奇生物医药科技生物 公司产品；引物合成为生工生物工程有限公司产 品；PCR 试剂盒为日本 TaKaRa 公司产品；琼脂 糖为上海百研生物科技公司产品；TAE 为广州赛 国生物科技公司产品；溴化乙锭为江苏凯基生物 公司产品。低温高速离心机为美国 Thermo 科技公 司产品；LX-400 迷你离心机为海门市其林贝尔仪器制造有限公司产品；酶标仪为美国 BioTek 仪器 有限公司；PCR 仪为美国 Applied Biosystems 公司 产品；水平式凝胶电泳槽及电泳仪均为上海 Tanon 科技公司产品；全自动凝胶成像系统为上海 Tanon 科技公司产品。 基因组 DNA 的制备 按照 DNA 抽提试剂盒说明书要求（上海源奇生物 医药科技有限公司）提取基因组DNA，测定吸光度， 所有用于PCR的DNA样本的OD260/280比值均＞ 1.8， 去离子水稀释基因组 DNA 样品至 50-150 ng/μl。 目的基因的 PCR 扩增 根据 GenBank 上目标基因序列，由 生工生物工程（上海）股份有限公司合成：正义链： 5′-GACTGAGTACAAACTGGTGG-3′，反义链：5′-TG CATAACTGAATGTATACCC-3′，扩增产物长度 250 bp；PCR 扩增的反应体系 50 μl：10×PCR buffer （Mg2+ ）5 μl + dNTP Mixture 4 μl + 引物 F 0.5 μl+ 引物 R 0.5 μl + Tap 酶 0.25 μl + DNA 标本 2 μl， 去离子水补足体积（PCR 试剂盒来自宝日医生物 技术有限公司）。

结 果

NRAS 基因 PCR 扩增产物琼脂糖凝胶电泳结果及 基因测序图列于图 1、图 2。108 例 AML 患者中发 现，11 例有 NRAS 突变，其中 G12D 6 例、G13D 3 例、G61K 2 例，突变率为 10.2%。108 例 AML 患者中 105 例有完整核型分析资料。 10 例 NRAS 突变患者拥有可供分析的染色体核 型，其中 4 例为正常核型，故其在正常核型中的 突变率为 7.84%，与未突变组比较无明显差异（P ＞ 0.05）。细胞遗传学高危、中危、低危患者分 别 为 1 例、6 例 和 3 例， 所 占 比 分 别 为 12.5%、 10.17%、4.55%。3 组间的统计学分析亦无明显差 异（P＞ 0.05）。

讨 论 

NRAS 基因编码是一种 21KD 的膜蛋白，其作为一 种“分子开关”，位于细胞膜表面，可以将细胞 外的信号转至细胞核，从而调节细胞的增殖、分 化和凋亡 。而 NRAS 突变主要是集中在外显子 1、 2 处涉及 12、13、61 密码子的错义突变，其作 为目前公认的致人 AML 的 2 类合作突变中的Ⅰ类 突变，赋予细胞增殖和生存优势，从而参与 AML 的发生发展。

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