旋转摇床对于颈椎病模型兔颈肌形态学变化分析

颈椎病是指颈椎椎间盘退变及其继发的病理改变 刺激或压迫其周围神经、血管等组织而引起系列临床 症状及体征，几乎每个人在一生中都会经历不同程度 的颈痛，流行病学研究表明，颈椎病的人均年发生率约 为 10. 4% ～ 21. 3%，而长期低头位工作者是颈椎病 高发人群。针刀疗法直接作用于病变软组织，进行 局部铲剥、切割、松解，而达到治疗颈椎病的目的，是治 疗颈椎病的成熟疗法。许多学者认为颈肌在维持颈 椎生物力学平衡及颈椎病发生发展过程中的每一个环 节都至关重要，目前针刀治疗颈椎病的研究多为临 床疗效的总结，机制研究薄弱。本研究旨在观察针刀 干预后颈椎病模型兔受损颈肌的形态学改变，以期为 临床针刀治疗颈椎病提供实验依据。

1 材料和方法

1. 1 实验材料

选择 40 只清洁级新西兰兔，平均 月龄 6 个月，体质量(2. 5 ± 0. 5) kg，由南昌龙平兔业 有限 公 司 提 供，动 物 合 格 证 号: SCXK ( 赣) 2014 － 0005。

造模盒:自行联系厂商并制 作;针刀:一次性无菌针刀，0. 30 mm × 30 mm，由北京 卓越华友医疗器械有限公司生产;毫针:一次性针灸 针，0. 25 mm × 25 mm，由马鞍山邦德医疗器械有限公 司生产;电子针灸仪:SDZ － II 型华佗牌电针仪，由苏 州医疗用品厂有限公司生产;QB － 206 多用途旋转摇 床:海门其林贝尔仪器制造有限公司;切片机:金华科 迪 KD － 202A 石蜡切片机;光学显微镜:Nikon eclipse 50i 显微镜，日本 Nikon 株式会社。

酒精:南昌远洋化工有限公 司;二甲苯:南昌远洋化工有限公司;石蜡:南昌明瑞化 工有限公司;苏木素伊红染色试剂:南昌雨露实验器材 有限公司。<>

1. 2 实验方法

1. 2. 1 动物分组
 

动物喂养 1 周后，按照动物体质量 进行编号，并应用随机数字表法将其分为空白组、模型 组、针刀组及电针组，每组 10 只。实验过程中，除空白 组以外，所有动物参与造模。于江西中医药大学基础 医学院实验动物中心喂养动物，所有动物自由进食饮 水。

参照余家阔 报道的长期低头位 造模方法，使家兔颈部屈曲呈 45°，每天造模 1 次，使 造模兔持续保持低头位 5 h，连续 12 周。造模前及造 模后 2 h 节点分别进行颈椎侧位 X 线片拍摄，以判断 造模是否成功。

空白组:正常饲养。模型组:造模 后正常饲养。电针组:造模成功 1 周后进行电针干预。 具体电针干预方法为:参照《实验针灸学》，根据比 较解剖取穴法结合模拟骨度取天柱、百劳、大杼穴，毫 针针刺，刺入深度约 10 mm，接韩氏穴位神经刺激仪 (型号:HANS LH202H)，频率 2 ～ 100 Hz，强度 1 mA， 波形疏密波，每次 20 min。隔天治疗 1 次，每周 3 次， 共治疗 3 周。 针刀组:造模成功 1 周后进行针刀干预。针刀操 作按照以下步骤:①定点:对模型兔颈椎棘突两侧的软 组织进行触诊，寻找硬结和条索状物，根据颈部肌肉僵 硬度和条索状物的部位，在 C2 ～ C7 棘 突 旁 开 1 ～1. 5 cm处和 C2 ～ C7 棘突点，每次于两侧分别定两点 和相应棘突点为进针点，4 次针刀干预进针点交替选 取，对进针点标记，消毒;②定向:刀口线与后正中线平 行，刀体与项后冠状面垂直;③加压:戴无菌手套，以左 手拇指为押指，在进针点按压;④刺入:针刀迅速刺入 进针点皮下组织达骨面，对病变部位行纵向小范围切 割 3 次、横向剥离 2 次后出针，切割范围在 3 mm 内， 出针刀加压止血 3 min。针刀干预每周 1 次，共干预 3 次，共 3 周。

实验取材于干预结束 1 周后进行。采 用空气栓塞法将所有实验动物处死，切开颈部皮肤，迅 速取出颈后伸肌(具体为 C3 ～ C4 棘突旁深层肌肉)， 生理盐水冲洗后放入 10% 福尔马林溶液中，固定 7 d 后，使用石蜡将颈肌组织常规包埋、切片处理，切片厚 度约 6 μm。

二甲苯透明 10 min × 3 次脱蜡，梯 度乙醇脱水各 5 min，蒸馏水冲洗 5 min，染色:苏木精 染色 5 min，自来水洗，盐酸酒精分化 15 s，自来水洗 15 min，0. 5% 伊红染色 1 min，蒸馏水洗 2 min，再次梯 度酒精脱水 5 min，染色后再次二甲苯透明 5 min × 3 次脱蜡，使用中性树胶封固颈肌组织切片，在光镜下观 察并拍照。

各组实验动物造模前一般情况良好，皮毛光泽柔 顺，神态安静，双眼有神，体态自然，性情温和，反应灵 敏，摄食饮水正常，排便正常。造模后模型组新西兰兔 与空白组相比，整体情况较差，皮毛脏乱，精神不振，双 眼无神，体态蜷缩，喜卧少动，胆小怯人，食欲不佳，体 质量下降，部分出现腹泻，及前肢跛行、活动不利等。 针刀及电针治疗期间整体状态有所改善。

针刀及电针治疗结束后，对各个组别的实验动物 进行颈部触诊。空白组实验兔颈部肌肉柔软，无僵硬、 紧张感，活动灵活;模型组实验兔颈部肌肉僵硬、紧张， 可触及明显条索状物、结节;针刀组颈椎周围肌肉柔 软，未触及明显条索、结节;电针组与模型组比较，可触 及条索状物及结节变小。

造模前(第 1 次 X 线):X 线见各组动物生理曲度 存在，无骨赘形成、无椎间隙狭窄、椎间孔大小正常。 模型 组:整体上出现生理曲度变直，椎体边缘见骨质增生、 椎间隙变窄、椎间孔变小等病理改变，部分可见反张。 针刀组、电针组 X 线整体情况与模型组基本相似。

空白组可见肌组织标本颜色 多为淡粉色，表面较光滑，平直无扭曲。 模型组可见肌组织标本颜色暗，部分标本呈暗褐 色，表面不平整，组织迂曲。

所有标本经 HE 染色后在 光镜下(HE，40 × 10)观察。

近些年，随着颈椎病发病机制研究的深入，颈椎病 发病机制研究重点已逐渐从重视椎间盘、椎体、小关节 等骨质退变 转变为肌肉、韧带等软组织病变。许 多研究证实了颈部肌肉组织病变是颈椎病发病的重要 机制，甚至有学者提出了“肌源性颈椎病期”的专 科分期，认为颈椎病的发病是由于各种原因使颈部 肌肉发生病变，导致无菌炎症产生，进一步刺激、卡压 其附 近 神 经、血 管 等 组 织，从而诱导颈椎病发病。 Wharton 在电镜下观察到颈椎病患者颈部肌肉肌纤 维萎缩、大量线粒体聚集，且病情越严重，这些病理变 化更加明显。动物实验 也证实了损伤的颈部肌肉 可见明显的组织形态与结构改变。 研究表明颈部软组织保证了颈椎生理曲度及稳定 性，一旦软组织发生病变必然引起颈椎生理曲度改变 和节段失稳，长期低头位姿势可使颈部肌群超 负荷，出现并加重其劳损。

本研究中实验动物造模前、 造模后分别拍摄颈椎 X 线侧位片，造模前实验动物颈 椎生理曲度存在，椎间隙大小正常，未见明显骨质增生 等病理变化。造模后实验动物 X 线见椎间隙明显变 小，骨赘形成，曲度变直、甚至反弓，表明成功建立了颈 椎病模型。颈椎生理曲度异常是各型颈椎病早期 X 线征象，颈曲是 C4 ～ C5 椎间盘前厚后薄形成的 前凸性生理弯曲，正常生理曲度可增加颈椎强度及其 弹性、吸收震荡，是维持颈椎生理功能的基础。而研究 表明附着于颈椎周围的软组织对维持颈椎生理曲度及 颈椎稳定性方面起着重要作用。 多项实验 在光镜下观察颈椎病模型兔颈肌 的组织形态，发现针刀可改善损伤肌肉的组织形态。 也有研究在电镜下观察肌外膜纤维超微结构，研究结果提示针刀干预可减轻肌纤维化现象，进一步修复 肌肉。齐丹丹等进一步发现针刀操作时，局部既出 现了反应性炎症变化，同时又出现了肌纤维修复的现 象，并逐渐接近正常肌肉组织。本研究结果与之前的 研究相一致。本实验光镜下观察到模型组肌纤维形态 明显改变、细胞核增多、炎性细胞聚集等病理性改变， 而针刀组和电针组兔颈肌整体情况与模型组比较，明 显改善，且针刀修复颈部劳损肌肉的效果优于电针。 由此可见，针刀干预能够有效消除炎性细胞，减轻受损 肌纤维病理变化，有效促进病变肌肉组织修复，可能是 针刀治疗颈椎病的作用机制之一。