喃香豆素成分的含量测定和分析

白芷是一味重要的传统中药，为伞形科植物白 芷 Angelica dahurica ( Fisch． ex Hoffm．) Benth． et Hook． F 或 杭 白 芷 A． dahurica ( Fisch． ex Hoffm．) Benth． et Hook． F． var． formosana ( Boiss．) Shan et Yuan 的干燥根，始载于《神农本草经》。临床应 用广泛，具有解表散寒、祛风止痛、消肿排脓之功效， 用于治疗风寒感冒、鼻渊头痛、风湿痹痛等症。

超高效液相色谱系统( Waters Acquity UPLC HClass System，配 备 有 Acquity UPLC QSM、Acquity UPLC Sample、Manager FTN、Acquity UPLC PDA Detector 以及 Empower2 工作站) ; KQ-300DE 超声波清 洗器，昆山市超声仪器有限公司; CPA225D 电子天 平，北京赛多利斯科学仪器有限公司; FA2004B 电 子天平，上海佑科仪器仪表有限公司; Legend Micro 17Ｒ 微量离心机，Thermo Scientific; VOＲTEX-5 涡旋 仪，其林贝尔仪器制造有限公司; YKF-150 EDI 超纯 水设备，杭州华新净水有限公司。

欧前胡素( HI041232198 ) 、异欧前胡素 ( HI041233198) 、水和氧化前胡素( HA061413198) 、 佛手柑内酯 ( HB204394198 ) 、 白当归素( HB157470198) 、花椒毒酚( HX106886198) 、氧化前 胡素( HA062924198) 、花椒毒素( HA061509198) 、补 骨脂素( HP018120198) ，均购自宝鸡辰光生物科技 有限公司，纯度＞ 98%。实验用甲醇、乙腈均为色谱 纯( 美国 Fisher 公司) ，其余为分析纯; 水为屈臣氏 纯净水。10 批不同产地的白芷药材信息见表 1，经 陕西中医药大学陕西省中药资源产业化协同创新中 心刘世 军 副 教 授 鉴 定，为 白 芷 A． dahurica 的 干 燥根。

采用 ACQUITY UPLC BEH C18( 2. 1 mm×50 mm， 1. 7 μm) 色谱柱; 流动相为水( A) -乙腈( B) ; 梯度洗 脱，洗脱程序为: 0 ～ 5 min，10% ～ 25% B; 5 ～ 18 min， 25% ～ 60% B; 18 ～ 22 min，60% ～ 90% B; 22 ～ 25 min，90% ～10% B; 25～30 min，10% B; 流速为0. 2 mL·min－1 ; 进样量为2 μL; 柱温25 ℃; 检测波长设定为254 nm。9 个指标性成分的理论塔板数均不低于16 000，此色谱条 件检测时间短，信息量丰富，可用于指纹图谱及活性成 分含量测定分析。

精密称取花椒毒酚、水合氧化前胡素、白当归 素、补骨脂素、花椒毒素、佛手柑内酯、氧化前胡素、 欧前胡素和异欧前胡素对照品适量，分别加甲醇制备成质量浓度为 1 g·L－1 的单一对照品溶液; 精密吸取上述储备液适量，混合后加甲醇稀释，使最终制成 质量浓度分别为 50，250，50，25，25，50，500，500， 500 mg·L－1 的混合对照品溶液。

精密吸取 2. 2 项下混合对 照品溶液，用乙腈逐级稀释，摇匀。分别按 2. 1 项下 色谱条件进样分析，进样量为 2 μL，测定峰面积。 以峰面积为纵坐标( Y) ，质量浓度为横坐标( X) ，绘 制各标准曲线，得到花椒毒酚、水合氧化前胡素、白 当归素、补骨脂素、花椒毒素、佛手柑内酯、氧化前胡素、欧前胡素和异欧前胡素的线性回归方程和线性 范围，9 个呋喃香豆素成分在各浓度范 围内的线性关系良好。取混合对照品溶液，按 2. 1 项 下色谱条件连续进样 6 次，记录 10 个呋喃香豆素成 分的峰面积，计算 ＲSD，各呋喃香豆素成分峰面积 的 ＲSD 在 1. 6% ～ 2. 9%，表明仪器精密度良好。 按 2. 3 项下方法制备供试品 溶液，室温下放置，按 2. 1 项下色谱条件分别在 0， 2，4，8，12，24，48 h 时进样分析，测定各呋喃香豆素 成分的峰面积，计算 ＲSD，各呋喃香豆素成分峰面 积的 ＲSD 在 2. 3% ～ 3. 0%，说明样品在 48 h 内稳定 性良好。按 2. 3 项下方法平行制备 6 份的供试品溶液，2. 1 项下色谱条件进样分析，计算 10 个呋喃香豆素成分质量分数的 ＲSD，ＲSD 在 1. 2% ～ 3. 1%，说明方法的重复性良好。 精密称取已测定的供试 品样品 9 份，每份为 1 g，分别加入低、中、高 3 个浓 度的对照品混合液，每个浓度 3 份，按 2. 3 项下方法 平行制备供试品溶液，2. 1 项下色谱条件测定 10 个 呋喃香豆素的峰面积，并计算计算加样回收率和 ＲSD。各呋喃香豆素成分的平均加样回收率在 91. 80% ～ 101. 6%; ＲSD 小于 2. 6%。

本实验分别对提取溶剂、药材-溶液比以及超声 提取时间等条件进行了系统考察，以提取方法稳定 可行，提取效率最优，色谱峰响应、分离度良好为指 标，最终选择的提取溶剂为纯甲醇、药材-溶液比为 1 ∶20、超声提取时间为 1. 5 h。用 PDA 检测器对样 品进行 190 ～ 400 nm 全波长扫描，比较各波长下色 谱图，各呋喃香豆素成分均在 254 nm 有较大吸收， 因此选定 254 nm 为含量测定波长。

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