其林贝尔分享蜂蜜中的林可霉素残留的分析过程

蜂蜜由蜜蜂采集植物蜜腺分泌的汁液酿成，因其 含有丰富的营养价值和药用价值，越来越受到人们的 重视。我国的蜜蜂养殖史已有 2 000 多年，是世界上 第一养蜂大国。但是近年来由于工业排放、人为施 药和不规范的生产加工流程等因素导致蜂蜜中抗生 素残留问题严重，再加上主要贸易伙伴所设置的贸易 壁垒，严重影响了我国蜂产品的国际竞争力。

API4000 液相色谱 － 质谱仪，配有 电喷雾离子源( 美国 AB 公 司) ; Oasis HLB SPE 柱( 500 cc，6 ml; 美国 Waters 公司) ; 固相萃取装置( 美 国 Supelco 公司) ; 台式离心机( 美国 Thermo 公司) ; 自 动氮吹浓缩仪( 美国 Capiler Life Science 公司) ; 试管 振荡器( 中国其林贝尔有限公司) ; CP225D 电子分析 天平( 德国) 。标准品: 盐酸林可霉素( 纯度 98% ，批 号: 1501801) ; 罗红霉素标准品( 纯度 99． 7% ，批号: 3051708) ; 甲醇( 色谱纯，批号: I685730321) ; 乙腈( 色 谱 纯，批 号: I0901407732 ) ; 甲 酸 ( 色 谱 纯，批 号: 73C1606TI) ; 三羟基氨基甲烷( Tris) ( 色谱纯，批号: M20418010) ; 无水氯化钙( 分析纯，批号: 20180119) ; 实验用水由 Milli － Q 系统( 美国 Millipore 公司) 制得。

蜂蜜样品来自于江苏省 5 个市 ( 淮安、宿迁、泰州、南京、苏州) ，主要采集超市、农贸 市场、网店等流通环节样品。主要采集洋槐蜜、椴树 蜜、枣花蜜等 10 种蜂蜜，共计 50 份样品。

称取 2． 0 g 蜂蜜试样于 50 ml 离 心管中，加入 20 μl 1． 0 μg /ml 内标( 罗红霉素) ， 加入 25 ml 0． 2 mol /L 三羟甲基氨基甲烷( Tris) 缓冲 溶液，振荡混匀。Oasis HLB 固相萃取柱预先依次5 ml甲醇和 10 ml 活化。将待测液转移至活化后的 Oasis HLB 固相萃取柱上，待样液完全流出后，依次用 5 ml 水和 5 ml 甲醇 － 水( 2∶3，V /V) 溶液洗柱，弃去 全部流出液。减压抽干 20 min，随后用 5． 00 ml 甲醇 洗脱，收集洗脱液，在 40 ℃ 用氮气浓缩至近干。用 1． 00 ml甲 醇 － 水 ( 3 ∶7，V /V) 溶 液 定 容，涡 旋 过 0． 22 μm滤膜，供液相色谱 － 质谱/质谱测定。

色谱柱: ACQUITY UPLC BEH C18 柱( 2． 1 mm × 50 mm，1． 7 μm) ; 柱 温: 40 ℃。流动相: 0． 1% 甲酸水溶液( A) ，甲醇( B) ， 采用的梯度洗脱: 0 min ～ 2 min，15% B; 2 min ～ 3 min， 80% B; 3 min ～ 5 min，80% B; 5 min ～ 6 min，15% B; 6 min ～ 10 min，15% B。流速: 0． 25 ml /min。进样体 积: 5 μl。离子源: 电喷雾离子源( ESI) ，正离子方式 ( ESI + ) 扫描，检测方式为多反应监测( MＲM) 。离子 化电压: 5． 5 kV; 离子传输毛细管温度: 500 ℃ ; 气帘 气: 35 psi; 喷撞气( 氮气) : 12 psi; 喷雾气: 45 psi; 辅助 加热气: 45 psi; 接口加热: On。

准确称取 7 份不含林可霉 素的蜂蜜于 50 ml 离心管中，并分别加入不同体积的 林可霉素标准应用液，配制基质匹配标准系列，按本法 提取净化后测定，采用 MultiQuant 软件以定量离子对 的峰面积与内标物的比值进行制作标准曲线。结果表 明，林可霉素在 1． 0 μg /L ～ 100 μg /L 浓度内线性方程 为 y =0． 163 47x + 0． 146 86，相关系数为 0． 996。以信 噪比 S /N = 3 计算的检出限为 0． 2 μg /kg，以信噪比 S /N =10 计算的定量限为 0． 7 μg /kg。

选用不含待测组分的蜂蜜进 行 3 个浓度水平的添加回收实验，结果表明低浓度 ( 5 μg /kg) 下回收率为 107． 51% ，精密度为 4． 6% ; 中 浓度 ( 20 μg /kg) 下 回 收 率 为 100． 17% ，精 密 度 为 8． 6% ; 高浓度( 50 μg /kg) 下回收率为 92． 88% ，精密 度为 6． 8% 。

在全部 50 份样品中，林 可霉素的检出率为 24%，最大残留量为 2． 998 μg /kg。 以我国对林可霉素的复检要求判定( ＞ 50 μg /kg 需要 复检) ，100% 的样品合格。本次调查的蜂蜜品种有椴树蜂蜜、枇杷蜂蜜和枣花蜜等 10 个品种，不同种类蜂 蜜林可霉素的检出率和残留量有差异，如椴树蜜检出 率为 25． 0% ，洋槐蜜检出率为 14． 2% ，枣花蜜检出率 为 33． 3% ，枇杷蜜检出率为 0． 0% ，百花蜜检出率为 42． 8%。

建立了蜂蜜中林可霉素的测定方法。本法操作 简单、灵敏，特异性强，经实际样品检测表明，本法适 用于蜂蜜中林可霉素残留的分析确证，为食品安全提 供可靠的确证检测方法。



 

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