其林贝尔解析骨骼增高作用的要素

人体身高的决定性因素是生长激素，生长激素 的分泌主要与睡眠，尤 其 是 慢 波 睡 眠 ( slow wave sleep，SWS) 有关。酸枣仁是养心安神中药，药食 同源之上品，是治疗各种失眠的常用中药。酸枣 仁所含的化学成分主要有皂苷类、黄酮类、生物碱 类、三萜类、甾体类、脂肪酸类、挥发油类等。研 究表明，酸枣仁皂苷具有镇静催眠作用，但是，酸 枣仁及其所含的化学成分是否可以促进身体增高， 尚未见文献报道。笔者前期研究发现，酸枣仁所含 的主要活性成分酸枣仁皂苷 A 具有促进慢波睡眠， 促进动物体内生长激素分泌及促进小白鼠骨骼增长 的作用。

SD 大白鼠 48 只，雌雄各半，SPF 级， 体质量( 220 ± 20) g，动物许可证号: SCXK( 豫) 2015- 0001。昆明种健康小白鼠 30 只( 来自同一时期每胎 3 只共10 胎) ，SPF 级，雄性，1 月龄，体质量( 16 ± 1) g，动物许可证号: SCXK( 豫) 2010-0002。同购于河 南省实验动物中心。动物喂养环境: 温度( 22 ± 2) ℃，湿度( 60 ± 10) % ，7∶00 － 19∶00 光照，噪音 ＜ 50 dB。实验中对实验动物的处置符合科技部颁布 的《关于善待实验动物指导性意见》中的相关规定。

酸枣仁提取物( 含酸枣仁总 皂苷 5% ，批号: 17-0523) ，购于陕西斯诺特生物技 术有限公司，酸枣仁皂苷 A 标准品( 批号: 110734- 120106，纯度 ＞ 98% ) 购于中国食品药品检定研究 院; 小白鼠生长激素 ELISA 试剂盒( 上海纪宁实业 有限公司，批号: 201511) ; 小白鼠 5-羟色胺受体蛋 白 1A ( 5-hydroxytryptamine 1A receptor，5-HT1AＲ) ELISA 试 剂 盒 ( 上海纪宁实业有限公司，批 号: 201510) ; 磷酸酶抑制剂( 上海碧云天生物技术有限 公司，批号: S1873) ; ＲIPA 细胞裂解液( 上海碧云天 生物技术有限公司，批号: P0013B) ; 胞浆胞核蛋白提取试剂盒( 南京凯基生物技术有限公司，批号: KGP150) ; BCA 蛋白浓度测定试剂盒( 上海碧云天 生物技术有限公司，批号: P0010) ; TEMED ( Amresco，批 号: Amresc00761 ) ; 蛋 白 marker ( 14-120KD) ( 北京全式金生物技术有限公司，批号: DM111) ; PVDF 膜 ( Millipore，批 号: IPVH00010 ) ; 兔 多 抗 5- HT1AＲ( Bioss，批号: Bs-1124r) ; 兔多抗 GAPDH( 杭 州贤至生物有限公司，批号: AB-P-Ｒ 001) ; HＲP 标 记羊抗兔二抗( 武汉博士德生物工程有限公司，批 号: BA1054) 。

酶标仪( Labsystems Multiskan MS，芬 兰，352 型) ; 离心机( 湖南湘仪实验室仪器开发有限公司，型号 HI650) ; 电转仪( 北京六一仪器厂，型号 DYCZ-40) ; 垂直电泳槽( 北京六一仪器厂，型号 DYCZ-24DN) ; 水平摇床( 江苏海门其林贝尔仪器制造有限公司，型号 TS-1) ; 磁力搅拌器( 江苏省金坛市 中大仪器厂，型号 T8-1) 。

将 30 只小白鼠随机分为 3 组， 每组 10 只，即对照组、酸枣仁提取物组、酸枣仁皂苷 A 组。48 只大白鼠随机分为 3 组，每组 16 只，即对 照组、酸枣仁提取物组、酸枣仁皂苷 A 组。实验动 物适应环境 7 d 后开始灌胃给药。

酸枣仁提取物大白鼠按 0． 220 mg·g － 1 体质量灌胃给药，小白鼠按 0． 320 mg·g － 1 体质量灌胃给药; 酸枣仁皂苷 A 大白鼠按 0. 011 mg·g － 1 体质量灌胃给药，小白鼠按 0． 016 mg·g － 1 体质量灌胃给药。实验药物用蒸馏水溶 解，酸枣仁提取物混悬液，酸枣仁皂苷 A 水溶液。 实验动物每日灌胃给药 1 次。对照组使用蒸馏水灌 胃。

分组后第 1 次测量原始 体长，3 组小白鼠原始体长比较无显著差异( P ＞ 0. 05) 。实验用药 20 d 后麻醉动物，放在台面上，将 身体拉直，用直尺测定体长，从头顶端到小白鼠臀尾 交接处即为小白鼠体长，精确到 1 mm。

使用小米手环 3 进行睡眠测定，大白鼠以 体积分数 7% 水合氯醛( 3． 3 mL·kg － 1 ) 腹腔注射麻 醉，将小米手环 3 用透明胶带固定于大白鼠颈部，每 1 个手环关联 1 部包含有小米运动软件的智能手 机。给药后，在光照情况下，人员撤离，保持安静的 环境，记录大白鼠睡眠状况。6 h 后取下小米手环3，通过相关联的手机查询大白鼠各睡眠时相的时 间。然后眼眶采血，室温下血液自然凝固 20 min，离 心半径 10 cm，3 000 r·min － 1 ，离心 20 min，收集上 清液，采用 ELISA 试剂盒测定血清 GH 水平。取一 半大白鼠脑组织，加入 PBS 冰浴中匀浆，离心，收集 上清液，ELISA 法检测脑组织 5-HT1AＲ 活性。

灌胃 20 d 后酸枣仁提取物组、酸枣仁皂苷 A 组体长明显优于 对照组，差异有统计学意义( P ＜ 0． 01) ，酸枣仁提取 物组和酸枣仁皂苷 A 组比较，差异无统计学意义， 说明酸枣仁提取物和酸枣仁皂苷 A 都可以明显增 加生长发育期小白鼠的体长，两者作用相当。见表 1。酸枣仁皂苷 A 可以促进大白鼠慢波睡眠时间( P ＜ 0． 05) ，酸枣 仁提取物也可以明显促进大白鼠慢波睡眠，与对照 组比较，差异有统计学意义( P ＜ 0． 01) ，说明药物可 以延长慢波睡眠。而两组对异相睡眠( paradoxical sleep，PS) 期无影响。由于药物促进了慢波睡眠，所 以用药组较对照组总睡眠时间明显延长，清醒时间 减少，而酸枣仁提取物和酸枣仁皂苷 A 比较，促进 慢波睡眠作用相当。见表 2。

酸枣仁 提取物及酸枣仁皂苷 A 可以明显促进大白鼠体内 GH 的分泌，体现在两组血清中 GH 明显高于对照组 ( P ＜ 0． 01) ，说明慢波睡眠时间的延长促进 GH 分 泌增多，这与文献报道相符。酸枣仁提取物组大白鼠脑组织 5-HT1AＲ 活性明 显高于对照组( P ＜ 0． 01) ，而酸枣仁皂苷 A 组的 5- HT1AＲ 活性较对照组也有一定的增高( P ＜ 0． 05) 。、

酸枣仁提取物和酸枣仁皂苷 A 都可以促进小 白鼠骨骼增长，其机制可能是提高脑组织 5-HT1AＲ 蛋白的表达，促进脑组织 5-HT1AＲ 的活性，从而引 起慢波睡眠的延长，进而促进生长激素的分泌。经 统计学分析，酸枣仁提取物作用更好，但两者没有统 计学差异。酸枣仁提取物含酸枣仁皂苷 A 单体相 当量，所以除了酸枣仁皂苷 A 外还含有其他成分， 如黄酮类、生物碱类、三萜类、甾体类、脂肪酸类、挥 发油类等。有文献报道，酸枣仁中黄酮苷类物 质斯皮诺素能通过 5-HT 系统的调节来发挥镇静催 眠作用。另有文献报道，酸枣仁总皂苷可明显抑 制小白鼠自发活动，促进睡眠，协同戊巴比妥钠的中 枢抑制作用，拮抗苯丙胺的中枢兴奋作用，其中枢抑 制作用呈一定的剂量依赖性。酸枣仁总黄酮 也能减少小白鼠自发活动，其中枢抑制作用也呈剂 量依赖性。所以，除了酸枣仁皂苷，黄酮类也发 挥着促进动物增高的作用。这可能就是酸枣仁提取 物具有很好的促进慢波睡眠从而促进骨骼发育的作 用原理。



 

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