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分析大鼠胆固醇逆向转运的影响的要素

返回列表 来源:未知 发布日期:2019-09-05 11:38【

现代医学中的血脂与中医学中 “膏脂”的意义颇为相似, 《王氏医存》有云: “肥人多痰,肥 人之病,皆因脾湿所致”,揭示脾虚与痰湿脂浊的 形成密切相关。脾为后天之本,主升清运化, 脾失健运,则津液代谢异常、浊脂内生。课题组前 期研究发现,脾虚状态下机体脂质代谢紊乱程度加剧。基于上述病机,课题组应用健脾降浊法作 为调节脾虚高脂血症大鼠脂质代谢紊乱的主要治 法。香砂六君子汤为益气健脾、温中化痰经典方剂,有研究发现,香砂六君子汤在降血脂、抗 氧化及抗炎症等方面疗效显著,对动脉粥样硬化有 明显的改善作用。



1 材料

1. 1 动物


SPF 级 SD 大鼠 40 只,8 周龄,体重 ( 190 ± 20) g,由辽宁长生生物科技股份有限公司提供, 实验动物许可证号: SCXK ( 辽) 2015-0001。饲养 于辽宁中医药大学实验动物中心,室内温度 18 ~ 22℃,湿度 40% ~ 70% ,单笼饲养,每天 12 /12h 昼夜明暗交替。动物实验符合辽宁中医药大学实验 动物伦理委员会标准,实验动物伦理审查编号 21006092017056。



1. 2 药物

香砂六君子汤由木香 6 g、砂仁 3 g、党参 12 g、 茯苓 12 g、白术 12 g、法半夏 6 g、陈皮 6 g、炙甘 草 6 g 组成,以上中药饮片均购于辽宁中医药大学 附属医院。药物浸泡 1 h 后,武火煮沸,文火煮 20 min,过滤,重复煎 3 次,合并滤液,浓缩至含 生药 0. 57 g /ml 和 1. 14 g /ml,冷却后 4℃保存。



1. 3 试剂及仪器

高脂饲料 ( 10% 猪油,1% 胆固醇,0. 5% 胆 酸钠,0. 2% 甲基硫氧嘧啶,5% 蔗糖,加 83. 3% 普通饲料,北京科澳协力饲料有限公司生产,批 号: 201708180) ; HE 染色试剂盒 ( 碧云天生物技 术有限公司,批号: C0105) ; D-木糖试剂盒 ( 南 京建 成 生 物 工 程 研 究 所,批 号: A035 ) ; Trizol ( 批号: CW0580) 、SYBR Green Mater Mix 试剂盒 ( 批号: CW2582) ,康为世纪生物科技有限公司; 4% 组织细胞固定液 ( 北京鼎国昌盛生物技术有限 责任公司,批号: AR-0211) ; 水合氯醛 ( 天津市 大茂化学试剂厂,批号: AR 302-17-0) ; 磷脂转移 蛋白 ( PLTP,批号: ml059545) 、卵磷脂胆固醇脂 酰转移酶 ( LCAT,批号: ml520176) 、胆固醇酯转 蛋白 ( CETP,批号: ml003189) 酶联免疫分析试 剂盒,上海酶联生物科技有限公司。 SHZ-88 型水浴恒温振荡器 ( 其林贝尔仪器制造有限公司) ; MULTISKAN FC 型酶标仪、ST16R 型冷冻高速离心机 ( Thermo 公司) ; BioSpec-nano 型紫外可见分光光度计 ( 日本岛津公司) ; 7500 型 实时 定 量 PCR 仪 ( Applied Biosystems 公 司 ) ; TAB-120FR 型全自动生化分析仪 ( 日本 东 芝 公 司) ; DM IL LED 普通型光学显微镜、ASP 6025 型 全自动脱水机、RM2235 型手动石蜡切片机、EG 1150H 型包埋机、HI1220 型烘片机,均购自 Leica 公司。



2 方法

40 只 SD 大鼠普通饲料适应性喂养 1 周后,按 体重采用随机数字表法分为正常对照组、高脂组、 脾虚高脂组、香砂六君子汤正常剂量组及香砂六君 子汤高剂量组,每组 8 只。脾虚高脂组、香砂六君 子汤正常剂量组及香砂六君子汤高剂量组大鼠采用 饮食不节加力竭游泳的复合方法造脾虚模型: 饱食 1 天,禁食 2 天,饮水不限。同时,每日将大 鼠于 35 ~ 37℃ 水中游泳至力竭,连续造模 15 天。 正常对照组喂饲基础饲料,其余各组喂饲高脂饲料 14 周建立高脂血症模型,自由摄食,饮水不限。 于第 10 周灌胃给药,按人和动物体表面积折算系 数换算,香砂六君子汤正常剂量组 ( 人体临床 等效剂量) 及香砂六君子汤高剂量组分别给予香 砂六君子汤 5. 67、11. 34 g /( kg·d) 灌胃,正常对 照组、高脂组及脾虚高脂组给予等体积的生理盐水 灌胃,4 周后取材。



3 结果

正常对照组肝细胞核圆且居中,细胞索结构清 晰,肝窦正常; 与正常对照组比较,高脂组和脾虚 高脂组肝细胞肿大变圆,空泡化明显,肝细胞形态 疏松,部分细胞核挤向胞膜,就空泡密度而言,脾 虚高脂组大鼠肝脏组织泡沫化更为严重; 香砂六君 子汤正常剂量组和香砂六君子汤高剂量组大鼠肝脏 细胞脂肪空泡显著减少,肝细胞肿胀减轻,细胞排列 整齐清晰,胞核正常,两组间差异不明显。



4 讨论

高脂血症是由多种因素引起的脂质代谢性疾 病,与心脑血管疾病的发生发展密切相关。根 据其病变特点将其归于中医学 “痰浊” “脂浊”等 范畴,多为脾肾不足、瘀血痰浊日久,而致清浊不 分、湿浊痰凝瘀血积聚而形成的本虚标实之证。 王智玉研究发现,痰湿、气虚体质与高脂血症 发病率呈正相关。痰湿体质多由脾虚失运或过食肥 甘厚味而致水液内停、聚而生痰,痰滞日久则阻滞 气机,浊脂内生。气虚体质之人多由先天后天之气 生化无源或消耗过多引发,气虚、痰湿的形成过程 皆与脾虚密切相关。课题组选用具有益气健脾、行 气化痰的香砂六君子汤加以治疗,方中党参、白术、茯苓、炙甘草健脾益气渗湿,陈皮、半夏行气 燥湿化痰,木香、砂仁相使而用,加强行气止痛化 湿、燥湿健脾和胃的功效,使痰浊得化、气虚得补。






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