浅谈诱导大鼠骨质疏松的作用

骨质疏松（osteoporosis，OP）是一种以骨量减 少、骨组织微结构退化为特征，致使骨脆性增加和 易于发生骨折的全身性骨代谢疾病 。该病多见于 绝经后妇女、老年男性和多种慢性病病人，日益引 起人们的重视。当前，治疗骨质疏松的药物主要有 三类：①抑制骨吸收，如雌激素、降钙素（CT）、双膦 酸盐；②促骨形成，如甲状旁腺激素（PTH）、胰岛素 样生长因子⁃1（IGF⁃1）；③促进骨矿化，如钙剂。

1 材料与方法

1.1 主要试剂及药物

雷奈酸锶干混悬剂，每袋2 g， 法国施维雅药厂，生产批号H20120291；地塞米松注 射液，每支2.5 mg，Sigma公司，生产批号H44024469； Rat IL⁃6 ELISA 检测试剂盒，Rat BALP ELISA 检测 试剂盒，Rat TRACP 5b ELISA检测试剂盒，Rat CTX⁃ I ELISA 检测试剂盒，Rat OCN ELISA 检测试剂盒， Rat HVD ELISA 检测试剂盒；多聚甲醛、伊红液、苏 木素（AR级）；MEM培养基、南美胎牛血清，等。

1.2 主要仪器

Multlskan 酶标仪（赛默飞世尔）， DZKW⁃4电子恒温水浴锅（北京中兴伟业），UPH⁃Ⅱ⁃ 10T优谱超纯水（成都超纯科技）；转轮式切片机（徕 卡⁃2016，德国），TSJ⁃Ⅱ型全自动封闭式组织脱水机 （中威电子），BMJ⁃Ⅲ型包埋机（中威电子），PHY⁃Ⅲ 型病理组织漂烘仪（中威电子），BA400Digital 数码 三目摄像显微镜（麦克奥迪）；倒置生物显微镜AE31 （麦克奥迪），MCO⁃15AC 二氧化碳培养箱（三洋电 机）；红外接种灭菌器MH-3000B(海门市其林贝尔)， BN⁃200高精密电子天平（台湾巨林樱花）。

1.3 实验动物

6~8 周龄 SPF 级雌性 SD 大鼠 30 只；体质量（226±8）g；3月龄SPF级雌性SD大鼠24 只，体质量（270±12）g，购于成都达硕实验动物有限 公司，实验动物生产许可证号：SCXK（川2013⁃24）， 使用许可证号：SYXK（川 2014⁃189）。动物处置符 合动物伦理学要求。

1.4 大鼠骨质疏松模型制备及实验分组 6~8周龄

清洁级雌性 SD 大鼠 30 只，饲喂常规饲料，自由饮 水，清洁级饲养。将大鼠随机分为5组：空白对照组 （不做处理），模型组（每周2次地塞米松1 mg/kg肌 肉注射），雷奈酸锶高剂量组（每周 2 次地塞米松 1 mg/kg肌肉注射+每天1次灌胃雷奈酸锶800 mg/kg）， 雷奈酸锶中剂量组（每周 2 次地塞米松 1 mg/kg 肌 注+每天1次灌胃雷奈酸锶600 mg/kg），雷奈酸锶低 剂量组（每周2次地塞米松1 mg/kg肌肉注射+每天1 次灌胃雷奈酸锶400 mg/kg），同室常规饲养5周，第 5 周最后 1 次给药结束后 2 h，采集样本，用于指标 检测。

1.5 左胫骨组织形态学测定

处死大鼠，分离左胫 骨，用4 %多聚甲醛固定3 d，然后10 % EDTA脱钙5 周，用电锯从矢状面剖开，暴露骨髓腔并取左胫骨近 端，制备常规脱钙骨组织蜡块，切4 μm厚骨组织切 片，HE染色，光镜下观察骨形态改变，每张切片选取 5个视野，取其平均值，利用MOTIC Med 6.0型图象分 析系统进行骨组织形态测量，计算骨形态指标：平均 骨小梁间距（Tb.sp），平均骨小梁厚度（Tb.Th）。

2 结果

2.1 大鼠骨组织形态学观察

HE 染色结果提示， 地塞米松模型组大鼠骨小梁变细、数量明显减少， 排列疏松，甚至断裂，骨小梁结构出现较多大的空 白区域；雷奈酸锶中、高剂量组（600，800 mg/kg）骨小梁变粗且致密，骨连续性较好，排列较为规则（图1）。 MOTIC Med 6.0型图像系统分析，较模型组，雷奈酸 锶中、高剂量组的平均骨小梁厚度明显升高（P＜ 0.05），骨小梁间距明显降低（P＜0.05）。见表1。

2.2 血清指标检测

模型组与空白组相比，所有检 测指标均差异有统计学意义（P＜0.01），表明所选指 标，具有良好的指示作用。雷奈酸锶高剂量组较模 型组大鼠血清IL⁃6、BALP、TRACP 5b、CTX⁃I均明显 降低（P＜0.05，P＜0.05），OCN、25⁃HVD 明显升高 （P＜0.05）。

2.3 大鼠成骨细胞增殖影响

雷奈酸锶高、中、低 含药血清组OD值和空白组比较，高、中剂量组有明 显细胞增殖作用（P＜0.05）；低剂量组细胞增殖作用 不明显（P＞0.05）。结果表明，高、中剂量雷奈酸锶载 药血清对大鼠成骨细胞增殖有明显促进作用。

3 讨论

骨质疏松是系统性骨骼性疾病，西医认为，其 发病机制在于骨形成代谢过程中，骨吸收和骨形成 发生失衡。临床表现为骨小梁变细变薄，断裂，数 量减少，孔隙变大，生物力学性能降低，骨密度下 降，往往伴随骨微观结构退化和骨量降低，骨脆性 增加，病人易发生骨折 。雷奈酸锶化学名为5［⁃ 二 （羧甲基）氨基］⁃3⁃羧甲基⁃4⁃氰基⁃2⁃噻吩羧酸二锶 盐，是由稳定态锶原子和有机雷奈酸组成，新型 的抗骨质疏松药物。


 

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