分析大鼠体内白藜芦醇胶束的药代动力学！

白藜芦醇( ＲESV) 是天然的非黄酮类多酚化合物，主 要来源于葡萄、花生、桑椹等，是肿瘤的化学预防剂， 也是降低血小板聚集，预防和治疗动脉粥样硬化、心脑 血管疾病的化学预防剂，广泛应用于保健品、医药和 食品等领域。其水溶性低、稳定性差，生物利用度低，在 光、热和氧化剂条件下不稳定，易被氧化降解，在一定程 度上限制了其应用。因此，开发安全性高、稳定性好的 新剂型来提高白藜芦醇的稳定性、水溶性和生物利用 度，具有重要临床意义。因其低溶解度、高渗透性，按 生物药剂学分类为Ⅱ类化合物，其生物利用度主要取决 于体外溶出速度。胶束在溶液中，两亲性共聚物可自 行组装成特定的超分子有序聚集体，形成一种稳定、澄 清的液体制剂，有助于增加药物的溶解度，提高生物利 用度。本研究中根据白藜芦醇的性质和疏水特性，以泊 洛沙姆 188 为载体，将其制成胶束，以提高白藜芦醇的 水溶性、稳定性，并使其半衰期延长，提高生物利用度， 扩大其临床应用。并以原料药为参比制剂，探讨白藜芦 醇胶束在大鼠体内的药代动力学过程。现报道如下。

1 仪器、试药与动物

仪器: 岛津 LC － 2010A 型色谱仪( 岛津色谱工作站，UV 检测器) ; AY220 型电子分析天平( SHTMADZU 公司) ; TGL － 16 g 型高速离心机( 上海安亭科学仪器厂) ; DAS 3． 0 软件( 中国药理学会数学药理专业委员会) ; Vortex － 5 型涡旋混合器( 海门市其林贝尔仪器制造有限公司) 。 试药: 白藜芦醇对照品( 含量为 98% ，南京森贝伽 生物科技有限公司，批号为 111535 － 201502) ; 白藜芦 醇原料药( 武汉远成赛创科技有限公司) ; 卡马西平对照 品( 含量为 99% ，上海哈灵生物科技有限公司，批号为 100142 － 201605) ; 白藜芦醇胶束( 自制) ; 乙腈( 色谱纯， 天津科密欧科技有限公司) 。 动物: 取 SD 大鼠 12 只，雄性，体质量为( 250 ± 20) g， 由辽宁中医药大学实验动物中心提供，动物使用许可证 号为 SCXK( 辽) 2015 － 0001。

2 方法与结果

2．1 溶液制备

取白藜芦醇对照品 10． 2 mg，精密称定，置 250 mL 棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质 量浓度为 40． 8 μg / mL 的白藜芦醇对照品贮备液。 精密称取白藜芦醇对照品 10． 0 mg，精密称定，与 上述同法操作，制成质量浓度为 40． 0 μg / mL 的白藜芦醇质量控制贮备液。 取卡马西平对照品 10． 1 mg，精密称定，置 10 mL 容 量 瓶 中 ，加 甲 醇 溶 解 并 稀 释 至 刻 度 ，摇 匀 ，即 得 1． 01 mg / mL 卡马西平贮备液。精密量取卡马西平贮备 液，加甲醇稀释得质量浓度为 25 μg / mL 的内标溶液。 以上溶液均于 4 ℃冰箱保存，备用。

2．2 色谱条件

色谱柱: AgilentExtendC18 柱( 150mm × 4． 6mm，5μm) ; 流动相: 乙腈 － 水( 30 ∶ 70，V / V) ; 流速: 1． 0 mL / min; 进 样量: 30 μL; 检测波长: 320 nm; 柱温: 室温。

2．3 血浆样品处理

取血浆 100 μL，置 2 mL 离心管中，依次加入 10 μL 甲醇，10 μL 内标溶液，50 μL 0． 5% 醋酸，200 μL 乙腈， 涡旋混合 60 s，离心 10 min( 12 000 r / min) ，取 100 μL 上清液置进样容器中，取 30 μL 进样分析。

2．4 方法学考察

专属性考察: 分别取 6 只大鼠空白血浆，除以甲醇 ( 内标溶液的溶剂) 替代内标溶液外，其余按 2． 3 项下方 法操作，得大鼠空白血浆样品色谱图 ( 图 1 A); 另取空 白血浆、白藜芦醇样品和内标，及第 1 只大鼠单次给药 后 0． 5 h 的血浆样品，按 2． 3 项下方法操作，得模拟样 品及实际样品色谱图( 图 1 B 和图 1 C) 。结果白藜芦醇 的保留时间为 3． 86 min，内标的保留时间为 7． 25 min， 空白血浆中的内源性物质和代谢物不干扰白藜芦醇样 品和内标( 卡马西平) 的测定。 标准曲线考察和定量限确定: 取标准贮备液适量， 加 空 白 血 浆 稀 释 成 质 量 浓 度 为 10，20，51，102，204， 510，1 020，2 550 ng / mL 的系列血浆样品，其余按 2． 3 项下方法操作，同一质量浓度进行双样本分析，记录色 谱图。以血浆中待测物浓度( C，ng / mL) 为横坐标、待测 物与内标物的峰面积比值( A) 为纵坐标，采用加权最小 二乘法进行回归运算，得直线回归方程 。结果白藜芦 醇质量浓度在 10 ～ 2 550 ng / mL 范围内与峰面积线性 关系良好，血浆样品的典型标准曲线回归方程为 Y = 0． 005 7 X + 0． 106 8，r = 0． 998 2 ( n = 8 )，最 低 定 量 限 ( LLOQ) 为质量浓度 10 ng / mL，可满足 SD 大鼠体内白藜芦醇测定的要求。

3 讨论

本研究中采用热熔挤出制剂法制备由功能性辅料 泊洛沙姆 188 与白藜芦醇组成的药物制剂，优于传统固 体分散体。以泊洛沙姆 188 为载体将白藜芦醇制成胶束 后能显著提高白藜芦醇在大鼠体内的生物利用度。 口服制剂出现双峰的可能原因如下。
1) 由于胃按一 定时间排空，药物分成 2 次达到小肠，造成药物先后入 血，出现双峰;
2) 药物在胃肠道的 2 个部位吸收，有快有 慢，因而出现双峰;
3) 肝 － 肠循环即经胆汁或部分经胆 汁排入肠道的药物，在肠道中又重新被吸收，经门静脉 又返回肝脏;
4) 制剂原因，如含有速释成分和缓释成分;
5) 脂溶性药物吸收后，迅速分布到组织中，在血液中药 物代谢到一定程度后，又出现二次入血。由于原料药 组并未出现双峰现象，仅白藜芦醇胶束组出现双峰现 象，故可排除机体本身的因素，如吸收部位和肝肠循环。 故考虑制剂的原因可能性较大。此制剂又并未含有速释 和缓释双成分，即排除此因素。白藜芦醇胶束组出现双 峰现象的原因可能为胶束在胃中析出，排空进入肠中后 再次被吸收，待进一步研究。