抗血小板药效相关基因多态性分析

动脉粥样硬化性心血管疾病( ASCVD) 被称为“发达 国家居民健康的头号杀手”，在发展中国家的发病率也 日趋增高 。血小板的粘附、活化和聚集在 ASCVD 的病 理生理过程中起重要作用。常用抗血小板聚集药物阿司 匹林是防治 ASCVD 的基石。2006 年，美国预防服务工 作组将服用阿司匹林作为心血管疾病高危人群成本效 益和临床价值较高的预防措施 。但部分患者服药后出 现阿司匹林抵抗( AR) ，发生率为 5． 5% ～ 60% 。AR 受 遗传、细胞和临床等多方面因素影响，目前有多种单核 苷酸多态性( SNP) 被报道与 AR 相关，如环氧合酶 － 1 ( COX － 1) 基因多态性、血小板糖蛋白( GP) Ⅱb /Ⅲa 基 因多态性、二磷酸腺苷( ADP) 受体 P2Y1 基因多态性、 血小板糖蛋白Ⅰa /Ⅱa 受体基因多态性等。

1 资料与方法

1．1 研究对象

选取医院心血管内科 2018 年 4 月至 9 月收治的 需口服阿司匹林治疗的 ASCVD 患者 358 例( 年龄 18 ～ 80 岁，性别不限) 。排除有阿司匹林禁忌证，3 个月内发 生过脑出血，1 个月内进行过重大手术，以及严重感染、 恶性肿瘤和免疫系统疾病患者。本研究经医院医学伦理 委员会批准，患者签署知情同意书。

1．2 仪器与试药

仪器: Fluotec 48E 型微量荧光检测仪( 西安天隆科 技 有限 公 司) ; Sorvall TM LegendTM Micro 17R 型 离 心机 ( Thermo Scientific 公司) ; LX － 300 型迷你离心机和 Vortex － 5 漩涡混合器( 海门其林贝尔仪器制作有限公司) 。 试药: 阿司匹林肠溶片 (Bayer Vital GmbH，进口药 品注册证号 H20130339，规格为每片 100 mg)。测序反应 通用试剂盒( 北京华夏时代基因科技发展有限公司) 。

1．3 阿司匹林抗血小板药效相关基因多态性检测

采集患者静脉血 2 mL，置乙二胺四乙酸( EDTA) 抗 凝管中，经裂解、结合、洗涤、洗脱、纯化，得样本 DNA 片 段，然后经聚合酶链反应( PCR) 进行扩增，通过焦磷酸 测序法测定基因多态性。

1．4 统计学处理

采用 SPSS 24． 0 统计学软件分析。正态分布的连续性变量以 X ± s 表示，行双侧 t 检验; 计数资料以百分率 (% )表示，行 χ 2 检验。P ＜0． 05 为差异有统计学意义。

2 结果

358 例患者中，GPⅢaPLA2( T ＞ C) 基因均为野生 型，无突变; PEAR1( G ＞ A) 基因野生( GG) 型 111 例，突 变杂合( GA) 型 180 例，突变纯合( AA) 型 67 例，突变率 68． 99% ; PTGS1( － 842A ＞ G) 基因野生( AA) 型 356 例， 突变杂合( AG) 型 2 例，突变率 0． 56% ; GP1BA( 5792C ＞T) 基因野生( CC) 型 307 例，突变杂合( CT) 型 48 例，突变 纯合( TT) 型 3 例，突变率 14． 25% 。详见表 1。

统计患者基因型时，排除 2 例 PTGS1 位点突变杂合 型，基于 GPⅢа PLA2 和 PTGS1 均为野生基因型，依据 PEAR1 和 GP1BA 基因型分组。PEAR1 基因野生型 111 例 ( 31． 18% ) ，突变型 245 例( 68． 82% ) ，GP1BA 基因野生型 305 例( 85． 67% ) ，突变型 51 例( 14． 33% ) 。纳入患者按基 因型的不同分组，野生组与突变组患者一般资料比较，差 异无统计学意义( P ＞0． 05) ，具有可比性。

3 讨论

阿司匹林是治疗和预防心脑血管疾病的主要药物， 但部分患者即使规律服用阿司匹林仍会发生 AR。目前， AR 的发生机制尚未研究清楚，以往研究提示，抗血小板 药物代谢及作用过程中涉及的相关基因多态性可能是 重要因素。研究较多的阿司匹林代谢相关基因有 COX、 血小板膜糖蛋白、PEAR1 及 PTGS1 等。血 GP 受体 GPⅢa 基因外显子 2 第 1 565 位基因 突变后，GPⅢa 蛋白 33 位点亮氨酸( PLA1) 被脯氨酸 ( PLA2) 置换，影响血小板的最终激活。SZCZEKLIK 等监测了携带 PLA 等位基因的 80 名健康男性服用阿司 匹林前后出血时间的改变，结果携带 PLA2 等位基因的 人 出 血 时 间 较 携 带 PLA1 等 位 基 因 者 短 ，提 示 携 带 PLA2 等 位 基 因 者 更 易 发 生 AR。GPIb 是 由 GPIbα 和 GPIbβ 2 个亚基构成，其表达减少会引发血小板的聚集 和释放。FUJIWARA 等发现，在 110 例健康男性受试 者中，血小板膜 GP1bα 多肽( GPIBA) 基因型为CC 或 CT 的，与基因型为 TT 的相比，AR 风险增加。