分析荷瘤小鼠移植肿瘤生长的影响

癌症是一类严重危害人体健康的疾病，运动对 癌症发生发展的影响已有一些研究，如近年有基础 研究指出运动训练可以促使小鼠脾NK细胞向肿瘤 细胞浸润，从而减缓肿瘤的发生发展，从一些临床 研究来看，适当的运动对于癌症患者也有一定的积 极作用。但不同运动强度对肿瘤发展的影响研 究较少。本研究选择有氧运动和力竭运动，探讨运 动及运动强度对小鼠肿瘤生长的影响。

1 材料与方法

1.1 动物

ICR 和 C57BL/6 小鼠，SPF 级体重 18—20g，雄 性，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，动物 合格证号SCXK(京)2016-0011。

1.2 瘤株

小鼠肝癌细胞 H22，小鼠黑色素瘤细胞 B16-F10，小鼠淋巴瘤细胞Yac-1。北京大学医学部实验 动物部提供。

1.3 实验试剂

RPMI1640培养基，胎牛血清，刀豆蛋白A(Con A)、四甲基偶氮唑盐(MTT)(美国 Sigma 公司)；二甲 基亚砜(DMSO)(北京化工厂)；乳酸脱氢酶细胞毒性 检测试剂盒(碧云天生物技术有限公司)。

1.4 仪器

Sartorious BT-25S型电子分析天平（北京Sartorius 仪器有限公司）；G&G JJ550 型精密电子天平 （美国双杰兄弟有限公司）；1—14 高速台式离心机 （德国Sigma公司）；VD-1320洁净工作台（哈尔滨市 东联电子技术开发有限公司）；超低温冰箱（美国 Sanyo 公司）；TE2000-S 型倒置显微镜（日本 Nikon 公司）；MCO-18A/C(UV) CO2培养箱(日本Sanyo公 司)；Spectra-Max-190 型酶标仪(美国分子仪器公司)，MH-Ⅰ型微量振荡器(江苏海门市其林贝尔仪器制造有限公司)。

1.5 小鼠分组与处理

小鼠适应性喂养两天后，将小鼠随机分为6组， 每组12只，分组如下： 正常对照组：本组小鼠均为未接瘤健康小鼠，自 由饮食，不做其他处理。 荷瘤对照组：本组小鼠均自由饮食，实验开始后 第7天接种肿瘤，不做其他处理。 持续有氧组：本组小鼠每天进行游泳训练：取一 大小约为 60cm × 50cm × 50cm 水槽，加水至深度 40cm，水温控制在（30±1）℃，将本组小鼠置于水槽 中游泳后捞出，时间从30min逐渐持续至60min，用 吹风机吹干后放回笼中，每天一次，在实验开始后第 7天接种肿瘤。 持续力竭组：本组小鼠每天进行负重游泳训练： 容器规格同上，负重为体重5%，材料为自制铁丝圈， 固定于小鼠尾部，将本组小鼠置于水槽中，小鼠游泳 至力竭捞出，用吹风机吹干后放回笼中，力竭判断标，即为小鼠游泳动作明显失调(划水频 率极其缓慢，连续下沉)，不能再坚持，沉入水底连续 8s不能回到水面，捞出水面时翻正反射消失。本组 小鼠在实验开始后第7天接种肿瘤。 荷瘤后有氧组：本组小鼠在实验开始后第7天 接种肿瘤，其后每天进行上述有氧游泳训练，每天一 次。 荷瘤后力竭组：本组小鼠在实验开始后第7天 接种肿瘤，其后每天进行上述力竭游泳训练，每天一 次。

1.6 小鼠肿瘤接种

将H22瘤株经ICR小鼠腹水 传代后，无菌取小鼠腹水瘤，用 PBS 稀释并调整细 胞密度为1×107 个/ml，接种于ICR小鼠前肢腋下，每 只 0.2ml；取对数生长期的 B16-F10 肿瘤细胞株，消 化后用PBS混悬并调整细胞密度为1×107 个/ml，接 种于C57BL/6小鼠前肢腋下，每只0.2ml，观察并记 录小鼠肿瘤生长情况。

1.7 小鼠体重、瘤重、脾脏重、胸腺重测定及脾脏指 数、胸腺指数计算

实验每天对小鼠进行一般情况观察，共持续21天，实验最后一天称重后处死小 鼠，剥离小鼠肿瘤组织、脾脏和胸腺，精密称定，计算 胸腺指数和脾脏指数：胸腺指数=[胸腺质量(mg)/体 重(g)]×10；脾脏指数=[脾脏质量(mg)/体重(g)]×10。

1.8 脾淋巴细胞增殖

小鼠无菌取脾后，常规分离脾 细胞，细胞悬液调整密度为 5×106 /ml，加入 96 孔细 胞培养板，100μl/孔，每组设4个复孔。将刀豆蛋白 conA 粉末用 PBS 溶液配成 5mg/ml 溶液，再用 1640 培养基最终稀释成5μg/ml刀豆蛋白溶液，实验组加 入该溶液 100μl/孔，对照组加入 100μl/孔的 1640 培 养基。置37℃，5%CO2培养箱中孵育20h，1000r/min 离心 96 孔板 10min，弃上清，然后加入 0.5mg/ml 的 MTT 100μl/孔，37℃，5%CO2培养箱中继续孵育4h， 再次以 1000r/min 离心 96 孔板 10min，弃上清，每孔 加入二甲基亚砜150μl，振荡摇匀，30min后，用酶标 仪测定(570nm)，脾淋巴细胞增殖能力计算：脾细胞 实验组A(吸光度)值-对照组A(吸收度)值。

1.9 Yac-1细胞乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测小鼠脾NK细胞杀伤能力

设置实验组和小鼠淋巴瘤细胞Yac-1自然释放 组，每组4个复孔，其中实验组将上述调整好的脾细 胞悬液加入96孔细胞培养板，100μl/孔，再将培养后 调整为1×105 /ml的Yac-1细胞悬液加入96孔细胞培 养板，100μl/孔；Yac-1细胞自然释放组加入100μl的 Yac-1 细胞悬液，再加入 100μl 1640 培养基。置 37℃,5%CO2培养箱中孵育 4h，1000r/min 离心 96 孔 板10min，每孔吸出120μl上清至一新的96孔细胞培 养板相应位置，各孔分别加入 60μl LDH 检测工作 液，混匀，室温(约25℃)避光孵育30min(可用铝箔包 裹后置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动)，然后用 酶标仪在490nm处测定吸光度值。脾NK细胞杀伤 活性计算：实验组A(吸光度)值-Yac-1自然释放组A( 吸光度)值。

2 结果

ICR 小鼠荷瘤后有氧组瘤重减少 （与荷瘤对照组相比，P＜0.05），持续有氧组及荷瘤 后力竭组瘤重有一定下降趋势，持续力竭组小鼠瘤重有一定增加趋势，但与荷瘤对照组相比均无显著 性差异。另外，ICR小鼠荷瘤对照组比正常对照组 和其他实验组体重均明显升高（与正常对照组相比， P＜0.001）。C57BL/6 小鼠持续力竭组瘤重增 加（与荷瘤对照组相比，P＜0.05），其他荷瘤组瘤重 与荷瘤对照组相比没有显著性差异。持续力竭组小 鼠体重显著高于荷瘤对照组（P＜0.01）及其他组小 鼠体重，可能与这组小鼠的瘤重较大有关。

3 讨论

研究小鼠荷瘤前后运动及不同运动强度对小鼠 体重、瘤重、脾指数、胸腺指数、脾淋巴细胞增殖能 力、脾NK细胞杀伤能力等的影响发现，虽然荷不同 移植性肿瘤的不同品系小鼠对有氧和力竭两种运动 强度迥异的游泳训练反应有所不同，但总的趋势相似：有氧运动可以抑制某些小鼠肿瘤生长而力竭运 动往往有利于某些肿瘤的生长；瘤重的变化与运动 强度对小鼠脾脏和胸腺功能的影响有关。



 

免责声明：文章仅供学习和交流，如涉及作品版权问题需要我方删除，请联系我们，我们会在第一时间进行处理。