大鼠体内药动学的考察（其林贝尔Vortex-5使用）

白藜芦醇（Resveratrol，RES），化学名为 3，5，4’-三 羟基芪，是非黄酮类多酚化合物，其主要存在于花生、 葡萄、虎杖等植物中。研究表明，RES具有广泛的药 理作用，主要包括免疫调节、抗肿瘤、抗炎、抗病毒、保护 心血管等作用。RES 属于生物药剂学分类系统（BCS）Ⅱ药物，其易溶于乙醇、甲醇、二甲基亚砜等有机 溶剂，然而在水中的溶解度极低，仅为30 μg/mL，且 具有光不稳定性。由于RES的水溶性差、性质不稳定、 生物利用度低，限制了其在临床上的应用。

1 材料

1.1 仪器

FA1004 精密电子天平（天津天马衡基仪器有限公 司）；LC-2010A 高效液相色谱仪（日本岛津公司）；Vortex-5 涡旋混合器（海门市其林贝尔仪器制造有限公司）； TGL-16g 高速离心机（上海安亭科学仪器厂）；UV1600 紫外分光光度计（上海美普达仪器有限公司）；Bioq-8000 喷雾干燥仪[汇和堂生物工程设备（上海）有限公司]。

1.2 药品与试剂

RES 原料药（武汉远成共创科技有限公司，批号： 20171225，纯度：98％）；RES对照品（南京森贝伽生物科 技有限公司，批号：111535-201502，纯度：98％）；卡马西 平对照品（内标，上海哈灵生物科技有限公司，批号： 100142-201605，纯度：98％）；RES/HP-β-CD/Chitosan（辽 宁中医药大学药学院自制，批号：20180321，RES 含量： 12％）；HP-β-CD（山东滨州智源生物科技有限公司，批 号：20171201）；Chitosan（潍坊海之源生物制品有限公 司，批号：160815A）；乙腈（瑞典欧森巴克化学公司，色谱 级）；醋酸（天津市科密欧化学试剂有限公司）。

1.3 动物

健康SD大鼠18只，♂，体质量（250±20）g，由辽宁 长生生物技术股份有限公司提供，实验动物生产许可证 号为SCXK（辽）2015-0001。

2 方法与结果

2.1 制剂中RES的含量测定

2.1.1 紫外吸收波长的选择

取干燥至恒质量的 RES 对照品适量，置于量瓶中，加 1％醋酸 10 mL，超声（功 率：180 W，频率：59 kHz，时间：2 min，下同）溶解，并用 无水乙醇稀释成质量浓度为5 μg/mL的溶液，同法配制 相应浓度的辅料溶液，采用紫外分光光度法，在 200～ 400 nm 波长范围内进行紫外扫描。结果显示，RES 在 307 nm波长处有最大吸收，辅料对其测定无干扰，故选 择307 nm 波长作为 RES 的含量测定波长。

2.1.2 标准曲线的绘制

精密称取干燥至恒质量的 RES 对照品 30 mg，置于 100 mL 量瓶中，加 1％醋酸 10 mL，超声溶解，并用无水乙醇定容至刻度，制成RES贮 备液。分别精密移取 RES 贮备液 0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8、2.0 mL，置于100 mL量瓶中，无水乙醇稀释至刻 度，摇匀，制成质量浓度为1.8、2.4、3.0、3.6、4.2、4.8、5.4、 6.0 µg/mL 的标准系列溶液。采用紫外分光光度法，在 307 nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标（y），质量 浓度为横坐标（x）进行回归分析，得回归方程为 y＝ 0.130 1x－0.009 2（R2 ＝0.999 7），结果表明，RES质量浓 度在1.8～6.0 µg/mL范围内与吸光度呈良好线性关系。

2.1.3 精密度试验

取 RES/HP-β-CD/Chitosan，研细， 精密称取适量，置于100 mL量瓶中，加1％醋酸10 mL， 超声，使RES溶解，放冷，加无水乙醇定容至刻度，摇匀， 经 0.45 μm 微孔滤膜滤过，精密量取续滤液 1 mL，置于 100 mL量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，制成RES质量 浓度分别为 2.8、4.2、5.4 μg/mL（低、中、高质量浓度）的 供试品溶液。在307 nm波长处测定供试品溶液中RES 吸光度，每个浓度重复测定3次，计算日内精密度；连续 测定3 d，计算日间精密度。结果显示，低、中、高质量浓 度供试品溶液的日内RSD分别为0.30％、0.32％、0.25％ （n＝3）；日间RSD分别为0.48％、0.21％、0.27％（n＝3）， 均符合方法学要求。

2.1.4 回收率试验

分别称取 24、30、36 mg 的 RES 对 照品以及 RES/HP-β-CD/Chitosan 相应处方量的辅料于 100 mL量瓶中，加1％醋酸10 mL，超声，使RES溶解，放 冷，加无水乙醇定容至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤 液1 mL，置于100 mL量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度， 摇匀，每个浓度制备3份，在307 nm波长处测定RES吸 光度，计算含量。以RES的测得值与加入值进行比较， 计算回收率。结果显示，平均回收率分别为 100.00％、 100.24％、99.70％（n＝3），符合方法学要求。


3 讨论

本课题组先通过制备RES/HP-β-CD 提高RES的体 外释放度；再利用Chitosan是自然界广泛存在的多糖，具 有良好的生物相容性、生物黏附性的特性，且对细胞无 毒 ，对 RES/HP-β-CD 进行改良，制得 RES/HP-β-CD/ Chitosan。本文体外释放度试验和大鼠体内药动学研究均表明，与RES原料药比较，RES/HP-β-CD的体外释放 度明显增加，体内药物浓度也明显增加；与 RES/HP-βCD 比较，RES/HP-β-CD/Chitosan 的释放明显减缓；且 RES/HP-β-CD/Chitosan 的 AUC0-12 h是 RES 原料药的 5.5 倍。该缓释载药系统提高药物生物利用度的主要原因 如下：
（1）由于Chitosan在稀酸条件下，氨基质子化，形成 NH3+ 。质子化后，正电荷互相排斥使得Chitosan分子链 呈舒展状态，黏度增大，在微球表面形成凝胶，延缓药物 释放；
（2）由于细胞膜表面为负电荷，通过正、负电荷吸 引Chitosan与黏膜产生黏附作用，延长药物在胃肠道的 滞留时间，从而增加药物生物利用度；
（3）Chitosan可 以改变 F肌动蛋白（F-actin）的分布从而影响细胞间紧密 连接的，通过打开连接增加黏膜的通透性，使药物更好 地吸收。


 

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