脓毒症大鼠脾组织的涡旋振荡器应用及分析

材料与方法

低温离心机( Eppendorf) ，涡旋振荡器( 海门其林贝尔) ，TissueLyser II 85300［QIAGEN，BGISEQ-500( 华大 基因) ］，Agilent 2100 Bioanalyzer( Invitrogen) ，紫外分光光度 计( NanoDropTM) 。清瘟败毒饮全成分每剂含生石膏 15 g、生 地黄 7． 5 g、水牛角 15 g、黄连2． 5 g、栀子5 g、桔梗5 g、黄芩5 g、知母 5 g、赤芍 5 g、玄参 5 g、连翘 5 g、甘草 5 g、丹皮 5 g、竹 叶 5 g，每剂用蒸馏水 60 ml 溶解即每 ml 含生药 1． 5 g。 Trizol 试剂( Invitrogen) ，去离子水 ( Ambion) ，三氯甲烷、异戊醇、异丙醇( 均为西陇化工) 。各组脾组织标本提取总 ＲNA 后，用带有 Oligo( dT) 的磁珠富集 mＲNA，并于提取到的 mＲNA 中加入 Fragmentation Buffer 使其片断成为短片段，再 以 片 断 后 的 mＲNA 为模板，用六碱基随机引物( random hexamers) 合成 cDNA 第一链，并加入缓冲液、dNTPs、ＲNase H 和 DNA polymerase I 合成 cDNA 第二链，经过 QiaQuick PCＲ 试剂盒纯化 并加 EB 缓冲液洗脱经末端修复、加碱基 A，加测序接头，再 经琼脂糖凝胶电泳回收目的大小片段，并进行 PCＲ 扩增，从 而完成整个文库制备工作，构建好的文库用 BGISEQ-500 进 行测序。

结果

A、B 组大鼠脾组织 TNF 信号通 路相关差异基因表达比较，两组同时上调的基因有 19 个，同 时下调的基因有 8 个，下调转正常的基因有 1 个，正常转上 调的基因有 5 个，上调转为正常基因有 7 个，正常转下调基 因有 13 个。脓毒症是一种由感染引起的复杂免疫系统紊乱，常危及 患者生命。目前，传统的广谱抗感染联合脏器支持治疗费用 高昂，给个人及社会造成巨大的医疗负担。相对于西医药 治疗，中医中药如对该病治疗具有效果，则更具有效益比。 相关研究显示，脓毒症早期予以中药干预治疗可预防脓毒症 相关性胃肠道疾病，有利于减少机械通气时间及病死率。

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